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嗜水气单胞菌的分子流行病学调查及其两种分型方法的研究

王春瑞

  致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)可引起水产动物传染性、爆发性疾病,在我国淡水养殖发达的华东地区,每年由此菌引起的淡水鱼类流行性疾病给该地区养殖业造成的经济损失尤为严重。为阐述华东地区主要淡水养殖鱼类嗜水气单胞菌病的分子流行病学特征,本研究采用传统流行病学调查与分子生物学技术相结合的方法进行了嗜水气单胞菌的分离鉴定、分型及其分子流行病学等方面的研究。主要研究工作包括如下几个部分: 2009年4月~2009年11月,采用实地采样、调查等方法,跟踪调查了华东地区的11个淡水养殖场主要养殖鱼类嗜水气单胞菌病的发病及流行情况,并对所分离病原菌进行了致病性嗜水气单胞菌的双重PCR鉴定。结果表明:嗜水气单胞菌自4月至11月均有检出;相关疾病发病率达73%,发病范围广,7~9月为疾病高发期,发病后平均死亡率为20%~30%;对团头鲂、鲫鱼等危害最为严重。发病原因主要由于夏、秋季节持续高温使得嗜水气单胞菌大量滋生,加之鱼种放养密度过高,养殖水体环境恶化,养殖区域过度密集等,诱发了疾病的广泛流行。 以O:5典型菌株BSK-10和O:9典型菌株TPS-30制备相应O抗原血清,并以此对分离、鉴定出的35株致病性嗜水气单胞菌进行血清分型。结果表明:O:5血清型菌株5株,O:9血清型菌株12株,非O:5或O:9菌株18株;O:5、O:9广泛分布于浙江、江苏、安徽等地,两种血清型菌株在鲢、鳙、鲫、鳊等宿主鱼类上均有分离,且以嗜水气单胞菌病高发的夏、秋季更为多见。 采用ERIC-PCR技术对分离、鉴定的35株致病性嗜水气单胞菌进行指纹图谱分型分析,进一步从基因水平上描述我国华东地区鱼源嗜水气单胞菌的流行病学特征。结果表明:在聚类重新标定距离为10的水平下,可以把35株菌归为5个类群,而E1类群可能是当前我国华东地区鲤科鱼类病原性嗜水气单胞菌的优势基因型类群;菌株基因型的地域性差异明显;菌株基因型无明显宿主差异,说明鲫、鳊、鲢、鳙的嗜水气单胞菌相关疾病的病原菌是一致的;不同季节的流行性基因型类群菌株有所不同。与传统血清分型方法相比,ERIC-PCR耗时少,操作简便,图形重复性和分辨率好,能够据此对所有菌株进行基因水平差异与关联上的分析,可作为一种实用的手段应用于嗜水气单胞菌分子流行病学调查与监测。 该研究对把握我国华东地区鱼源嗜水气单胞菌的流行病学特征有重要意义,可为制备针对性更强的疫苗提供科学依据,也为临床进行该病原菌的诊断与监测提供可靠方法。……   
[关键词]:嗜水气单胞菌;流行病学;双重PCR;血清分型;ERIC-PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:宁波大学2011年