手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

基于RAPD和SRAP标记的粤选系列匍匐翦股颖种质资源多样性研究

于得水

  本研究以318份粤选系列匍匐翦股颖种质资源为材料,通过田间筛选和分子特异性筛选相结合的方法,筛选出34份抗逆性较强的品种(品系)和30份特异性较强的辐射系材料。得到如下主要结果: 1.基于RAPD分子标记的34份田间筛选品种(品系)遗传多样性分析 (1)建立了一套适合翦股颖属植物基因组DNA提取的方法,即改良CTAB法,其提取的DNA纯度达到1.706~1.873;得率为107.992~165.733 ng/μg。 (2)以单因子试验优化翦股颖属植物RAPD-PCR反应体系,得出20ul反应体系最佳反应浓度:Taq酶1U;primer0.5μM;DNA40ng;dNTPs0.375 mM;10×PCRbuffer2.0μL;MgCl22.5 mM;ddH2O 12.05μL。 (3)由RAPD标记分析结果可知,从47条引物的扩增结果中统计了424条清晰可分辨的条带,其中有288条为多态性带,平均多态性比率(P)为67.9%。用Shannon多样性指数评价样品遗传多样性结果表明:平均多样性指数(I)为0.3862,遗传相似系数(H)为0.2414,观察等位基因数(Na)和有效等位基因数(Ne)分别为2和1.3715,遗传距离(GD)的范围在0.0720~0.8986之间,这些由田间选育的抗性较强的翦股颖品系遗传差异较为显著,株型和抗逆性不一,但遗传分化,遗传多样性较为狭窄,这可能是由辐射材料本身的缺陷导致的。 2.基于SRAP分子标记的160份辐射系材料遗传突变多样性分析 (1)利用正交设计法优化翦股颖属植物SRAP-PCR体系,得出25ul反应体系的最佳反应浓度:10X buffer2.5ul、Mg2+1.25mmol/L、dNTPs0.24 mmol/L、primer 0.20umol/L、Taq酶1U、DNA50ng。从72对引物组合中成功筛选出25对带型清晰、亮度高、无杂带的引物组合用于SRAP-PCR扩增。 (2)由SRAP标记分析结果可知:从160份辐射系材料中成功筛选出30份特异性较强的品系作为多样性分析材料,从25对引物对扩增结果中得到对引物的扩增结果中得到419条扩增片段,有232条具有多态性,平均多态性比率P(%)达到55.4%。平均多样性指数(I)为0.4672,平均基因多样性(He)为0.3040,观察等位基因数(Na)和有效等位基因数(Ne)分别为2和1.5011,遗传距离(GD)的范围在0.0092~0.7793之间。每个辐射系内部的突变率依次为:粤选1号辐射系<粤选3号新品系辐射系<粤选2号新品系辐射系。说明粤选2号新品系辐射系的内部辐射突变率较高,产生特异性的品种较多。Penncross与粤选1号辐射系、粤选2号新品系辐射系、粤选3号新品系辐射系的遗传相似度依次为:粤选1号辐射系>粤选2号新品系辐射系>粤选3号新品系辐射系。粤选1号国审品种出自Penncross也得到证明。 (3)利用SRAP标记构建DNA指纹图谱和进行遗传差异分析结果可知:17对引物对13份匍匐翦股颖品种(品系)进行PCR扩增,扩增出184条清晰的条带,其中有131条具有多态性,平均多态性条带比率为71%。利用引物对F2R5构建的13份匍匐翦股颖品系的DNA指纹图谱中包含有39条DNA多态性条带,12个多态性位点,带型间差异明显。13个品种(品系)遗传距离在0.0285~0.7587之间,其中粤选3号新品系和粤选5号新品系的遗传距离最近(GD= 0.0285),粤选1号和粤选4号的遗传距离最远(GD=0.7587),粤选1号与Penncross的遗传距离最小,为0.4536。……   
[关键词]:匍匐翦股颖;RAPD;SRAP;指纹图谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2010年