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补肾方剂诱导骨髓间充质干细胞增殖分化的理论和实验研究

谭峰

  研究目的:本研究在中医学“肾藏精”理论指导下,结合现代干细胞生物学研究成果,分析中医学“先天之精”与干细胞的相关性,以及肾精与骨髓间充质干细胞之间的内在联系;观察补肾方剂对骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响,探讨其调控骨髓间充质干细胞增殖、分化的分子机制,以期为探索“肾藏精”理论的科学内涵以及补肾方剂的临床应用提供理论和实验依据,为中医药在干细胞领域的深入研究提供新的思路。 研究方法: 1.理论研究:通过系统整理与总结中医学“精”、“先天之精”、“肾精”等理论以及现代干细胞研究的成果,采用比较分析的方法,对干细胞的“先天之精”属性以及“肾精”与间充质干细胞的相关性进行全面的分析,从干细胞层面探讨补肾法治疗肾精亏虚相关疾病的可能机理。 2.实验研究:采用全骨髓贴壁法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞;采用细胞形态学、细胞生长曲线、细胞周期、细胞表面标示检测相结合的方法,对培养的rBMSCs进鉴定;采用MTT法分别检测六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸—四首经典补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs细胞毒性及增殖的影响;采用ALP活性检测补肾方剂水提液对体外培养的rBMSCs骨向分化的影响;采用Western bloting检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCs BMP-2蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR检测经补肾方剂水提液干预后体外培养的rBMSCs Runx2 mRNA的表达。 研究结论: 1.理论研究:中医学理论之“先天之精”学说与干细胞之间无论来源还是功能均具有极高的相似性,而“肾精”与间充质干细胞的关系尤为密切,间充质干细胞可以看作“肾精”功能体现的主要物质基础,补肾方剂治疗肾精亏虚的效应机理可能与调控间充质干细胞增殖、分化等生物学行为有关。 2.实验研究: (1)全骨髓贴壁法分离的rBMSCs符合BMSCs的生物特性,建立的rBMSCs体外培养体系可满足实验要求。 (2)四首经典补肾方剂(六味地黄丸、肾气丸、左归丸、右归丸)水提液均可促进体外培养的rBMSCs增殖,且补肾阴(滋肾益精)方剂的作用强于补肾阳(温肾益精)方剂。 (3)四首经典补肾方剂水提液均可促进体外培养的rBMSCs向成骨细胞分化,且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方剂。 (4)四首经典补肾方剂水提液均可上调体外培养的rBMSCs中BMP-2的水平以及Runx2 mRNA的表达,而且补肾阳(温肾益精)方剂的作用强于补肾阴(滋肾益精)方剂,这与补肾方剂水提液诱导rBMSCs向成骨细胞分化的结果相一致,提示这可能是补肾方诱导rBMSCs向成骨细胞分化的作用机制。 (5)补肾阴方与补肾阳方在诱导rBMSCs增殖、分化方面表现出一定的趋向性,即补肾阴方在诱导rBMSCs增殖作用方面优于补肾阳方,而在诱导rBMSCs分化方面补肾阳方优于补肾阴方,由此提示补肾阳法与补肾阴法对rBMSCs增殖、分化作用的差异可能是其产生不同治疗效果的作用机制。……   
[关键词]:肾精;补肾方剂;骨髓间充质干细胞;增殖;分化
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:南京中医药大学2011年