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新疆加工番茄抗黄瓜花叶病毒转基因技术的研究

张瑜

  黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是典型的+ssRNA病毒,是寄主最多、分布最广、对经济作物危害最为严重的植物病毒之一。该病毒为三分体病毒,基因组分布在3条RNA分子上,同时也是研究RNA病毒在寄主上致病机制的模式病毒之一。 黄瓜花叶病毒是造成新疆加工番茄减产甚至绝产的重要病原,对于传统的抗病毒育种以及农药防治等方法不仅造成了环境污染,而且费时费力。但是RNAi技术拥有与传统的基因研究方法所不具备的优势,它为研究基因功能及植物基因表达调控提供了新途径,可通过有选择地抑制外源基因的表达,因此在病毒和病虫的防治方面展现了其独特之处。 本研究采用RT-PCR的方法扩增黄瓜花叶病毒加工番茄NS04分离物的3个基因组部分序列,利用基因系统进化树分析发现基因组编码的四个蛋白:CMV-1a与日本的毒源AB179764同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%和98.6%:CMV-2a与中国浙江的DQ412731同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为98.0%和96.5%;CMV-2b与S72187同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为95.5%和90.1%;CMV-CP与中国浙江的EF312025同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为93.7%和98.1%。这一结果证明了黄瓜花叶病毒极易发生变异,可以快速适应新的寄主和环境,从而造成其株系分化十分复杂这一结论。 最终选取CMV RAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,合成正反两段特异性片段并成功构建了pBi35SCR2RNAi真核表达载体,载体通过农杆菌介导的方法转入烟草,获得的转基因烟草做为后续攻毒实验的材料,并为研究植物抗黄瓜花叶病毒奠定了基础。……   
[关键词]:黄瓜花叶病毒;系统进化树;RNA干扰
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:石河子大学2010年