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Ⅰ型鸭肝炎病毒单克隆抗体的制备

李晓军

  鸭病毒性肝炎(Duck Viral Hepatitis, DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck Hepatitis Virus)引起的以侵害雏鸭为主的高死亡率的烈性传染病。DHV有三个型,分别命名为DHV-1、DHV-2和DHV-3,三个型之间没有抗原交叉性。其中以传统1型DHV分布最广泛,对3周龄内的雏鸭致死率高达90%以上。目前,2型和3型DHV只在中国、英国和美国有相关报道,但致死率较低。目前我国较为流行的DHV属于1型DHV(DHV-1A)。DHV-1属于小RNA病毒科,小RNA病毒属,是单股正链RNA病毒。该病毒颗粒比较小,大小只有20 nm左右。本研究将DHV-1进行增殖和纯化,利用纯化的DHV-1免疫小鼠,最终制备出10株抗DHV-1的单克隆抗体。 本实验将DHV-1接种鸡胚,收取24 h~96 h死亡鸡胚的尿囊液。经过氯仿抽提后将病毒用PEG-6000进行浓缩,浓缩后的病毒悬液以5×104×g的速度进行离心16 h。将纯化的DHV-1免疫6周龄的BALB/c雌鼠,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞在PEG-1450的作用下融合。利用间接ELISA方法进行筛选和三次亚克隆,最终得到10株抗DHV-1的单克隆抗体,分别命名为AF8(线性)、BD6(线性)、AF2、AF3、AD4、AE2、AG1、DB6(线性)、BG6和DH11。并对该10株单克隆抗体的效价、特异性、稳定性、亚型、腹水效价和中和活性进行了鉴定。结果表明:10株单克隆抗体的细胞上清效价高达1:2048,腹水效价高达1:409600;传代25代和冻存6个月以后,将杂交瘤细胞上清进行ELISA检测,发现细胞分泌抗体的能力稳定性较好;其中有8株杂交瘤细胞分泌的抗体类型为IgG1,2株杂交瘤细胞分泌的抗体类型为IgM,轻链类型均为κ链;利用ELISA方法对其特异性进行检测,结果显示10株单克隆抗体有6株单克隆抗体与DHV-1C产生交叉反应,但与SPF鸡胚尿囊液、呼肠孤病毒和鹅细小病毒没有交叉反应,特异性较好。 抗DHV-1单克隆抗体的成功制备为今后建立快速敏感的DHV-1诊断方法奠定了基础,也为DHV-1蛋白结构和功能的研究以及病毒的分子致病机理提供有利条件。……   
[关键词]:鸭肝炎病毒;单克隆抗体;ELISA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2011年