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独角莲块茎抗肿瘤有效部位的筛选及其化学成分初步研究

王春成

  为了寻找独角莲块茎抗肿瘤的活性物质基础和合理开发利用独角莲。本研究以独角莲块茎粉为原料,采用超临界C02萃取技术和匀浆萃取技术两种提取方法进行提取,所得的超临界C02提取物经乙醚萃取得到两个片段,即乙醚层和甲醇层;所得的匀浆提取物经二氯甲烷、正丁醇、水依次萃取得到三个片段,即二氯甲烷层、正丁醇层和水层。通过气相色谱质谱联用仪对两个低极性片段进行化学成分分析。通过噻哗蓝(MTT)比色法考察了五个片段对八种人源癌细胞系的体外抑制活性,以IC50值为主要评价指标。通过对匀浆提取物二氯甲烷层的分离纯化,最终鉴定了两个化合物,即p-谷甾醇(p-Sitosterol)和胡萝卜苷(Daucosterol),通过MTT比色法考察了五种人源癌细胞系对p-谷甾醇(p-Sitosterol)的敏感性。本研究为进一步探索独角莲块茎抗肿瘤作用机制及合理有效地开发利用独角莲块茎提供科学依据。 1.通过超临界CO2萃取技术与匀浆萃取技术的比较可得出: 尽管应用匀浆萃取法所获得的二氯甲烷层萃取物的得率略低于应用超临界CO2萃取技术所得到的乙醚层萃取物的得率,但是两种提取方法相比,匀浆萃取技术具有提取速度快,可应用于大规模生产的优点。 2.通过气相色谱质谱联用仪(GC-MS)对两个低极性片段的成分分析比较得出: 两种萃取物的成分组成不同,相同成分的含量也不同,但是主要成分还是大体一致的,即p-谷甾醇、棕榈酸和亚油酸三种物质在两种萃取物中都作为主要成分存在,并且这三种物质分别占超临界提取物乙醚层和匀浆提取物二氯甲烷层的57.89%和64.77%。 3.通过噻唑蓝(MTT)比色法对五个片段进行的抗癌活性初筛得出: 五个片段中,只有超临界C02萃取的乙醚层和匀浆提取的二氯甲烷层两个片段有抑瘤活性,但也只是针对胃癌SGC-7901、卵巢癌HO-8910、结肠癌HCT-116、肝癌BEL-7402和肝癌SMMC-7721五种癌细胞有作用,两种提取物对不同瘤株的增殖抑制活性不同。所试八种细胞株中,肝癌SMMC-7721细胞是对两种提取物均最为敏感的细胞株。通过该实验不仅证实了独角莲块茎的确具有抗肿瘤的功效,也表明独角莲块茎的抗肿瘤有效成分主要集中在低极性片段。 4.独角莲块茎粉匀浆提取物二氯甲烷层分离鉴定出两个化合物即化合物1-2(β-谷甾醇)和化合物6(胡萝卜苷)。通过MTT实验不仅证实了β-谷甾醇具有抗肿瘤作用,肝癌细胞BEL-7402对β-谷甾醇最为敏感。也可证明p-谷甾醇可能是独角莲块茎抗肿瘤的主要有效成分。……   
[关键词]:独角莲;超临界CO_2萃取;匀浆萃取;气相色谱-质谱分析;噻唑蓝比色法;抗肿瘤活性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北林业大学2011年