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Fpr3的原核表达及其单克隆抗体的制备

邓妍

  FKBP是生物中广泛存在的一个蛋白质家族。目前在酵母中已经发现了FKBP家族的四个成员:Fpr1, Fpr2, Fpr3, Fpr4。Fpr3是核仁蛋白,可以参与核糖体的装配,指导核糖体或者相关蛋白质穿越核孔复合体。Fpr3还对细胞周期具有调控作用,当细胞周期出现异常情况时,Fpr3就会发挥作用,使细胞周期停滞在G2期。正是由于Fpr3重要的生理功能,我们希望了解其空间结构,但是Fpr3很难结晶。单克隆抗体是一种专门针对一种抗原决定簇的抗体。当单独的蛋白质不能结晶时,往往能与其抗体共同结晶。抗体与相应的蛋白质结合后,可以稳定蛋白质的构象,有利于提高蛋白质结晶的成功率。此时,抗体的作用就相当于分子伴侣。分子伴侣可以与不稳定的蛋白结构结合,通过控制结合和释放来帮助其折叠,组装,转运和降解,而不构成蛋白质结构执行功能时的组份。本实验通过将pEGX-5X-1-fpr3转入大肠杆菌E.coliBL21中,IPTG诱导表达GST-Fpr3融合蛋白,分离纯化蛋白后免疫小鼠,通过细胞融合技术获得了2株可以稳定分泌Fpr3抗体的细胞株,纯化后的单克隆抗体,通过计算得到其分子量为152kDa,这与抗体分子量的理论值相符。对腹水做效价检测和亚类的鉴定,最终得到2株细胞株分泌的抗体的亚类均为IgG1,效价分别为1.5×104,1.0x105。同时还通过Western blot的方法鉴定单克隆抗体的特异性,最终结果证明这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体可以特异性的识别Fpr3蛋白。利用抗原和抗体特异性的结合,对我们以后研究Fpr3蛋白的结构和功能起着非常重要的作用。……   
[关键词]:单克隆抗体;Fpr3;蛋白质结晶;分子伴侣
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中师范大学2011年