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青天葵中总氨基酸的提取纯化工艺及指纹图谱研究

吴月娜

  青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nervilia fordii (Hance) Schltr.的全草,是我国传统出口中药。别名独叶莲、独脚莲、珍珠叶等。性寒味甘,归心、肺、肝经。能润肺,清热解毒,散瘀止痛。主治肺痨咯血,肺热咳嗽,口腔炎,咽喉肿痛,瘰疬,疮疡肿毒,跌打损伤。 本文主要对青天葵的相关文献、氨基酸的测定方法、总氨基酸的提取、分离纯化进行研究,并应用柱前衍生-HPLC法建立青天葵中氨基酸类成分的指纹图谱。 文献研究:通过从种质资源与生物学特征、生物形态、鉴别、化学成分、药理、应用研究和研究前景等方面对青天葵进行综述,并对总氨基酸的提取分离纯化方法、药理活性及指纹图谱研究概况进行了总结,为实验方案的设计及实验操作提供理论依据。 质量研究:对青天葵中氨基酸进行薄层鉴别。供试品与对照品分别点于同一含4%磷酸氢二钠的硅胶G薄层板上使成条带,以正丁醇-冰醋酸-水(4:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%茚三酮乙醇溶液,置日光下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相位置上,共检验出亮氨酸、色氨酸、缬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、天冬氨酸六种氨基酸。 氨基酸测定方法研究:利用α—氨基酸与茚三酮反应产生颜色,产生的颜色可以使溶液的吸光度变化的原理,采用可见光分光光度法测定青天葵中总游离氨基酸的含量。分析了显色pH、显色剂用量、显色温度、显色时间及冷却时间对吸光度的影响。 总氨基酸提取工艺研究:以青天葵中总游离氨基酸提取率为考察指标,在对提取溶媒、提取方法、提取温度、提取时间、提取次数及料液比进行单因素考察的基础上,采用正交试验设计对工艺参数进行优选,并进行验证试验。确定了最佳提取工艺为:以水作为提取溶剂,料液比1:20,水浴40℃下浸提1.0 h。 总氨基酸提取液脱色工艺研究:以青天葵提取液色素除去率和氨基酸损失率为考察指标,对脱色溶液pH、活性炭用量、脱色时间及脱色温度进行单因素考察的基础上,采用正交试验对工艺参数进行优选,并进行验证试验。确立了最佳的工艺条件为活性炭加入量1.0g/100mL,脱色温度40℃,提取液pH值为3.0,脱色时间为30 min。 总氨基酸纯化工艺研究:利用732阳离子吸附交换树脂对氨基酸进行纯化,对离子吸附交换树脂对氨基酸吸附的动力学吸附及吸附时间、上样浓度、上样流速、泄漏曲线及洗脱剂氨水的洗脱浓度进行考察,确定最佳的富集工艺并进行工艺验证。 应用柱前衍生-高效液相色谱法建立青天葵总氨基酸指纹图谱研究:采用柱前衍生化HPLC法,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,流动相为:(A)pH6.5醋酸钠缓冲盐溶液、(B)乙腈,CAPCELL PAK C18 UG120 S5 (250mm×4.6mm)色谱柱,柱温40℃,流速1.0mL/min,检测波长为254 nm;共检测出16个共有特征峰,分别为天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸和一种未知氨基酸。……   
[关键词]:青天葵;总氨基酸;工艺;指纹图谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:广州中医药大学2011年