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农杆菌介导AtICE1转化大豆的研究和大豆GmICE1基因的初步分析

可庆波

  大豆是重要的经济作物,当前对大豆遗传转化的研究正逐步深入,转基因技术越来越多的被应用于对大豆性状的改良上。拟南芥ICE1基因是已知的冷胁迫下非依赖ABA途径的最上游的转录因子,植物在遭受冷胁迫时,它能结合到CBF3的启动子上并激活CBF3的表达,CBF转录因子再结合到COR的启动子元件DRE/CRT上,通过一系列级联响应,最终促使植物产生一定的抗寒能力。本试验利用实验室已克隆的ICE1基因,构建了植物表达载体pCAMBIA1304-35S-ICE1-polyA,将此载体和实验室已保存的载体pCAMBIA1300-Rd29A-ICE1-polyA一并用于大豆的遗传转化,获得转基因植株。 本试验主要研究成果如下: (1)以六种东北地区广泛种植的大豆品种为材料,对大豆子叶节茎再生体系进行优化;垦农18(KN18),垦农4 (KN4)和合丰50 (HF50)是再生能力较强的大豆品种。 (2)以KN18,KN4和HF50的子叶节为材料,详细研究了影响农杆菌介导大豆转化的各种因素,包括菌液浓度、共培养时间、共培养温度、乙酰丁香酮的浓度、巯基类抗氧化剂和表面活性剂SilwetL-77的添加、筛选压力的选定和筛选方案的优化等,显著提高大豆的遗传转化效率。 (3)利用上述再生和转化体系,获得33株转pCAMBIA1304-35S-ICE1-polyA的抗性植株和18株转pCAMBIA1300-Rd29A -ICE1-polyA的抗性植株,部分植株已经PCR和Southern bloting鉴定。 (4)试验对大豆自身的转录因子GmICE1进行了初步分析,研究发现,GmICE1是组成型表达,编码一MYC样bHLH转录活化因子,具有多个激酶磷酸化位点和跨膜区域;并且在低温、高盐和干旱胁迫下能过量表达。……   
[关键词]:AtICE1基因;大豆子叶节;农杆菌;遗传转化;GmICE1基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:黑龙江八一农垦大学2011年