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山东省日照地区H9亚型AIV的分离、鉴定及HA基因的序列分析

阎秀琴

  禽流感是由A型流感病毒引起的禽类传染病,临床表现为呼吸道感染,产蛋量下降,头颈水肿和腹泻。H9亚型禽流感为低致病力禽流感,能引起少量死亡或不死亡,表现为生长障碍和产蛋量下降。H9亚型禽流感病毒(AIV)在包括我国在内的东南亚及世界许多国家分布广泛,中国大陆1994年首次公开报道从鸡群中分离到H9亚型AIV,随后便在一些地区形成小规模的流行,未波及全国。但1998年春夏开始的H9亚型禽流感在短短的几个月时间内就形成波及20多个省区的全国范围大流行,给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。1998年以来我国发生的H9亚型AI传播效率高、速度快和范围广,1999年又从人类病毒中分离出H9亚型AIV,对于它存在的潜在危害已经越来越多的受到关注。 本试验从山东省日照地区发生疑似禽流感的病死鸡脏器中分离出4株H9亚型禽流感病毒,并对其进行了生物学特性研究和HA基因的序列分析。旨在了解分离的4株H9亚型禽流感病毒的毒力及HA基因的变异,从而为更好的预防控制H9亚型禽流感病毒提供一定的理论基础。 试验一H9亚型AIV的分离鉴定及生物学特性研究 本试验从临床表现症状疑似禽流感的病死鸡脏器中分离得到4株H9亚型禽流感病毒,命名为SDRZ1、SDRZ2、SDRZ3、SDRZ4株。首先通过血凝特性的测定、鸡胚致病力的测定、鸡胚平均死亡时间的测定和1日龄雏鸡脑内接种指数测定等方法对10株禽流感H9亚型毒株的致病力进行分析和比较。结果表明,从山东日照地区分离到的4株禽流感H9亚型毒株的致病力不强,其HA效价在2~8~2~9之间, EID_(50)在10~(-6.15)/0.2mL~10~(-8.69)/0.2mL之间,其中SDRZ2毒株的EID_(50)为10~(-8.69)/0.2mL,表出较其它3株病毒强的致病力,其它3株病毒的EID_(50)在10~(-6.15)/0.2mL~10~(-6.57)/0.2mL之间。这4株病毒的鸡胚平均死亡时间差异不大,在90.0h~103.2h之间。其中SDRZ2毒株的鸡胚平均死亡时间最短为90.0h,说明该病毒的致病力较强;而其他病毒的鸡胚平均死亡时间都在90h以上,说明它们的致病力较弱。攻毒鸡胚孵化出的雏鸡和攻毒雏鸡均出现了明显的剖检症状。 试验二4株H9亚型AIV HA基因克隆测序及序列分析 本研究采用RT-PCR方法成功扩增出了4株H9亚型AIV的HA基因片段。序列分析结果表明,扩增获得的基因片段长度为549 bp。核苷酸和氨基酸序列同源性分析表明,这4株毒株彼此关系密切,同源性在93.7%以上,与山东省2003年分离的H9亚型AIV同源性为94.5%,并没有随着时间和地区的不同而发生较大的变异。与国内其它省份H9亚型AIV同源性为78.9%~96.9%。系统进化树分析结果表明,这4株毒株与山东、广州、南京、河北H9亚型AIV毒株亲缘性较近,属于同一分支。由此可见山东地区H9亚型禽流感的发生和流行与广州、南京、河北地区H9亚型禽流感病毒的发生密切相关。……   
[关键词]:H9亚型禽流感病毒;生物学特性;HA基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2010年