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抗犬瘟热病毒P1蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

于萍萍

  犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一种危害犬的高度接触性传染病。该病感染性强,发病率高,极易继发细菌、病毒感染或二次感染。虽然犬瘟热弱毒疫苗已广泛应用,但是随着CD宿主范围的不断扩大,疫苗株毒力的增强,以及新的强毒株的不断涌现,该病已成为危害犬、毛皮经济动物及野生动物的重大疫病之一。因此,及时对CD病畜做出确切的诊断,掌握治疗的最佳时机,是当前的重中之重。 P基因由1655个核糖核苷酸组成,位于基因组的1742~3396核苷酸处。其中P基因包含两个部分重叠的阅读框架,编码三种蛋白,结构蛋白P,非结构蛋白V和C。P蛋白是CDV结构蛋白中第二大蛋白,具有聚合酶的功能,在接种病毒12h后可以检测出为磷酸化的P蛋白,是出现早,且持续存在的蛋白,且基因在该病毒的谱系中极为保守,将其作为诊断抗原或制备诊断抗体具有可行性。本研究以Ameirica 1型疫苗变异株为基础,在国内首次表达纯化了P1(232-507AA)蛋白,通过其中P间接免疫试验发现,在病毒感染细胞P蛋白存在细胞核,这大概与P蛋白转录复制功能分不开;以纯化的P1蛋白免疫BABL/c小鼠,制作单克隆抗体,得到两株特异性的单克隆抗体E9E4C10和E9F8D9,为IgG2b亚型。期间用纯化的CDV制备兔高免血清。对获得的单抗和多抗采用ProteinG柱纯化,一方面,以CDV多抗制备胶体金探针,以制作的两株单抗包被纤维素膜作为检测线,以商品化的羊抗兔IgG抗体作为控制线,制备胶体金免疫试纸条,检出病毒浓度为1×105.4TCTD50/ml;另一方面,选取两株单抗包被ELISA板,用生物素标记的犬瘟热兔高免血清检测,建立双抗体夹心检测病毒方法,病毒检出浓度为5X103.4 TCTD50/ml。……   
[关键词]:犬瘟热;磷蛋白;单克隆抗体;免疫层析试纸及双抗体夹心
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2011年