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人参多糖诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

王秦

  目的:通过严格的体外实验,研究人参多糖(GPS)诱导HL-60(急性早幼粒白血病细胞株)凋亡过程中survivin和caspase-3的变化。了解不同浓度人参多糖对HL-60增殖、凋亡的影响以及诱导HL-60凋亡的最佳浓度。期望寻找一种新药可单用或联合其它药物减轻患者症状,提高患者生存质量。方法:1.用含5%胎牛血清的RPMI1640培养基培养人白血病细胞株HL-60于25ml的培养瓶中,置于37℃、5%C02、饱和湿度的培养箱中培养,每2~3天传代一次,取对数生长期的细胞进行实验。2.将细胞浓度调整为2×103/ml的细胞悬液接种于96孔酶标板,共设5个实验组(每组设3个平行空,并重复实验),每孔加细胞悬液50ul,以终浓度含GPS 50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml各50ul为实验组,空白组加等量培养基,作用24h、48h、72h后分别用CCK-8试剂盒检测GPS对HL-60抑制作用并计算抑制率。3.将细胞浓度调整为5×102/ml的细胞悬液接种于六孔板,每孔加细胞悬液2ml,第一孔加2ml培养基为阴性组,其余五孔分别加入终浓度为50μg/ml、100μg/ml、150μg /ml、200μg/ml、250μg/ml的GPS 2ml为实验组,作用72h后酶联免疫吸附法(ELISA法)检测调亡抑制因子(Survivin)表达情况。4.将细胞浓度调整为2×106/ml的细胞悬液接种于六孔板,每孔加细胞悬液1ml,第一孔加1ml培养基为阴性组,其余五孔分别加入终浓度为50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的GPSlml为实验组,作用72h后用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测凋亡相关因子caspase-3活性。结果:1.CCK-8结果显示不同浓度的GPS(50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml)对HL-60都有抑制作用,而且呈时间和浓度依赖性,随着GPS浓度增加和作用时间的延长其抑制作用增强。结论:1.GPS对白血病细胞HL-60有明显抑制增值作用,且呈时间浓度依赖性。2.酶联免疫吸附法(ELISA法)检测凋亡抑制因子(Survivin)结果显示不同浓度的人参多糖(50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml)对调亡抑制因子(Survivin)都有抑制作用,随着人参多糖浓度增加凋亡抑制抑制因子Survivin降低。3. caspase家族是细胞凋亡过程中的关键元件,它的激活或超常表达均引起细胞凋亡,因此又称为死亡蛋白酶,可通过与众多蛋白因子的相互作用调控细胞凋亡。已发现的14个家族成员中caspase-3是最重要的效应型caspase。大多数触发细胞凋亡的因素,最终都要通过caspase-3介导的信号传递途径导致细胞凋亡。酶联免疫吸附法(ELISA法)检测结果显示不同浓度的人参多糖(50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml)都能激活凋亡相关因子caspase-3,通过caspase-3介导的信号传递途径导致HL-60细胞凋亡,随着人参多糖浓度增加caspase-3活性增强。4.GPS在临床治疗白血病方面有重要作用,联合其他化疗药物可能达到更好效果。……   
[关键词]:人参多糖;HL-60细胞;凋亡;Survivin;Caspase-3
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:泸州医学院2011年