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饲料和动物性食品中三聚氰胺检测技术研究

钟永本

  本研究合成了三聚氰胺半抗原,并采用混合酸酐法合成了免疫抗原和包被抗原。半抗原与牛血清白蛋白、卵清蛋白的偶联比分别为10:1和8:1。用免疫抗原免疫新西兰白兔,所得血清经饱和硫酸铵-辛酸沉淀法纯化抗体IgG。 以该抗体为基础建立了一种间接竞争ELISA方法。方阵滴定法确定包被抗原和抗体的最适工作浓度分别为4000和1000倍稀释。该方法对三聚氰胺有较高的特异性,同时对环丙胺嗪有59.7%的交叉反应率。以抑制率为纵坐标,分别以三聚氰胺和环丙胺嗪浓度的对数为横坐标绘制标准曲线,针对三聚氰胺和环丙胺嗪的线性方程分别为Y=-24.938X+106.53,Y=-23.856X+109.46。该ELISA方法对三聚氰胺和环丙胺嗪的IC50分别为185 ng/mL和310 ng/mL,对三聚氰胺和环丙胺嗪的最低检测限分别为4.6ng/mL和6.5ng/mL。在空白饲料、牛奶中按1-125ng/g(mL)的浓度添加三聚氰胺,添加回收率分别为84.5%-98.03%和61.6 %-78.72%,变异系数分别为2.0%-2.9%和4.2%-9.6%。在鸡肉、鸡蛋中按1-125ng/g(mL)的浓度添加环丙胺嗪,添加回收率分别为80.44-97.39%和75.64-93.25%,变异系数分别为1.0%-4.9%和1.4%-3.3%。 以该抗体为基础制备了免疫亲和色谱柱(IAC),确定了IAC柱的上样、洗涤、洗脱及再生条件。该柱对三聚氰胺的动态柱容量为1250ng,绝对柱容量为125ng,且每根IAC柱可连续使用30次后,柱容量仍可达320ng。然后,以IAC柱为样品前处理技术建立了三聚氰胺残留检测的IAC-HPLC法,对三聚氰胺的检测限为15ng/mL,定量限为25ng/mL。以15,30,105,150ng/g的浓度在空白牛奶、鸡肉、鸡蛋中添加三聚氰胺,回收率分别为90.7%-101.4%、86.0%-97.3%、84.7%-93.6%,变异系数分别为11.1%-16.5%、8.8%-17.9%、11.9%-19.7%。通过比较,证明IAC柱的净化效果优于常规固相萃取柱的净化效果。 因此,本研究建立的ELISA法可以作为快速筛选方法,IAC-HPLC法作为确证性方法用于动物性食品中三聚氰胺残留的日常监控。……   
[关键词]:三聚氰胺;环丙胺嗪;ELISA;免疫亲和色谱;HPLC
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2011年