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亚剂量氟铃脲对昆虫免疫的干扰机制及血细胞高通量药物筛选

贺媛

  昆虫免疫是其适应复杂的生存环境,维持和稳定内环境的重要屏障。尽管已有众多细胞免疫反应的文献报道,但目前对于干扰和调节昆虫免疫信号系统的生化信息仍较少。本论文拟以亚剂量氟铃脲为研究对象,从昆虫免疫和血淋巴生理的角度探明亚剂量氟铃脲对昆虫免疫的干扰机制及对昆虫个体生长发育的生理效应,为阐明昆虫免疫防卫能力的变化与昆虫生存适合度的相关性提供初步的实验依据。同时,建立了昆虫血细胞基础上的免疫药物高通量筛选体系,拟为靶向性药物筛选提供筛选平台。 研究表明,亚剂量氟铃脲在昆虫体内具有积累致死效应,剂量依赖性地延迟斜纹夜蛾幼虫的生命历期、降低试虫体重和体长等。亚剂量氟铃脲作用后,粘虫粒血细胞发生膨胀,血细胞数目(THC)呈剂量依赖性下降,但不同类型血细胞组成(DHC)无明显变化;斜纹夜蛾幼虫的THC浆血细胞比例上升,而粒血细胞比例下降,血淋巴中总糖和海藻糖含量上升,其中血细胞中海藻糖水平达到对照试虫的6.0倍,甘油酯含量也受到药剂作用的影响。 亚剂量氟铃脲能激活粘虫血淋巴酚氧化酶(PO),0.5mg/L氟铃脲作用时6龄粘虫血浆PO的活力约为对照2.8倍。采用NADPH-黄递酶还原法证实了粘虫血细胞中存在一氧化氮合酶(NOS),且LPS和SephadexG-100对NOS具有一定的诱导效应。离体血淋巴和活体研究表明,低剂量氟铃脲(0.1mg/L)对NOS有激活作用,但随氟铃脲浓度升高,NOS活力呈剂量依赖性下降。 血细胞筛选体系研究表明,粘虫血细胞在含有62.5μg/L苯基硫脲的TNF-FH昆虫培养基中生长状态良好,有特定的形态变化和铺展行为,且仍具有免疫吞噬酵母和细菌功能。不同溶剂如DMSO、DMF、丙酮等在不超过0.1%浓度条件下对血细胞的形态和结构没有影响。研究了氟虫腈和毒死蜱等9种杀虫剂对离体血细胞形态和酵母吞噬功能的作用,结果表明毒死蜱的细胞毒性最显著,细胞内颗粒物增多呈凋亡形态。对33个新化合物的初步筛选表明,两个呋喃查耳酮类化合物明显影响浆血细胞形态和铺展行为,外源药物基本不影响血细胞酵母吞噬功能。……   
[关键词]:亚剂量氟铃脲;昆虫免疫;血细胞;高通量筛选
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华东理工大学2011年