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以慈航丹方药探讨含挥发性成分复方用“半仿生提取法”研究的模式

于定荣

  目的:以慈航丹方药为例,通过半仿生提取法(SBE法)制备分子量≤1000Da提取物为最终产物,探讨含挥发性成分的中药复方药效物质用“SBE法”研究的基本思路与模式。 方法:①首先对慈航丹方药进行基源、性状鉴定与质量鉴定研究;②将方中含挥发性药物(当归、川芎、香附)用超临界流体萃取,以均匀设计U7(75)表发布点试验,在饮片、设备、技术参数相同的基础上作SFE-CO2萃取,萃取物另器保存;以藁苯内酯、盐酸川芎嗪、α-香附酮、总萃取物为指标,综合评判,优选出方药超临界萃取(SFE-CO2)较佳工艺条件;③将超临界萃取后的药渣与方中益母草混合,用半仿生法提取,采用均匀设计U9(91×33)表发布点试验,以盐酸水苏碱、盐酸川芎嗪、阿魏酸、总糖及分子量≤1000Da提取物为指标,综合评判,优选出SBE法制备分子量≤1000Da提取物的条件;④在乙醇浓度30%-80%范围内,采用比例分割法,以上述相同的指标和评判方法,优选出方药醇提制备分子量≤1000Da提取物的较佳醇浓度;⑤以上述相同的指标和评判方法,作方药3种方法(SBE法、WE法、AE法)分子量≤1000Da提取物的多指标成分比较;⑥因化学等值不一定生物等效,故作方药3种方法分子量≤1000Da提取物的活血调经、止痛、抗炎等主要药效及毒性的研究比较;⑦对方药3种方法分子量≤1000Da提取物药液及其兔含药血清作HPLC指纹图谱的研究比较;⑧对方药3种方法分子量≤1000Da提取液的兔含药血清作大鼠离体子宫平滑肌作用的研究比较;⑨最后综合评判分析,优选出慈航丹方药的最佳提取方法和工艺条件。 结果:①方中所用的中药皆符合《中国药典》2005版一部各项下规定,均为合格的饮片;②优选出慈航丹方中含挥发性成分的中药超临界流体萃取的工艺条件为:萃取压力30MPa、萃取温度48℃、解析温度Ⅰ60℃、解析温度Ⅱ30℃、萃取时间4.0h。③优选出慈航丹方药的SBE法工艺条件为:3煎用水的pH依次为:6.0、7.5、8.8;提取时间依次为2.0h、1.5h、1.5h。④优选出醇提的最佳浓度为80%;⑤3种方法提取液的综合评判值的顺序为:YSBE>YAE>YWE;⑥以SBE液的含药血清HPLC指纹图谱,优选出兔的最佳采血时间为1.5h;给药剂量为7.0g·Kg-1(生药·体重-1);3种方法提取液及其含药血清的HPLC指纹图谱比较研究结果表明,以SBE组色谱中特征峰峰数最多,特征峰总面积最大,共有峰重叠率最高;⑦3种方法提取液的主要药效试验研究结果表明,SBE液的活血调经、止痛、抗炎作用的效果最强;该试验结果与用多指标综合评判的提取工艺优选结果及指纹图谱的比较研究结果相吻合;最大耐受量试验动物无一死亡,3种方法提取液的毒理学研究结果无显著性差异;⑧3种方法提取液含药血清对大鼠离体子宫平滑肌的收缩频率、收缩张力和收缩幅度均有抑制作用;与对照组比较,均有显著性差异(P<0.05);与SBE组相比,AE组、WE组亦有显著性差异(P<0.05),其中SBE液的抑制作用最强;⑨综合评判结果表明,慈航丹方药的3种提取方法中,以SBE法为最佳。 结论:慈航丹方药的提取,以先将含挥发性成分的中药用SFE-CO2萃取,其药渣与方中益母草混合,再用SBE法提取,经离心-膜滤法制得分子量≤1000Da提取物,其多指标综合评判效果最佳;SBE法分子量≤1000Da提取液及其含药血清与其他提取方法(AE法、WE法)分子量≤1000Da提取液作相应比较,以SBE法提取液的药效物质含量高,药理作用最强。因此,慈航丹方药以SBE法提取为佳。 本研究将化学成分(盐酸水苏碱、盐酸川芎嗪、阿魏酸、总糖)及分子量≤1000Da提取物、主要药效、分子量≤1000Da提取液的指纹图谱及其含药血清指纹图谱有机结合起来,对慈航丹方药进行了SBE法系统的研究,进一步证明了该法研究设计的科学性、合理性,丰富和完善了“用灰思维方式建立中药半仿生提取法”的基本模式。以分子量≤1000Da提取物量为最终产物,能体现中药整体、综合、客观、模糊的特点,为选用现代药物剂型提供了技术支撑,拓展了中药现代化研究的思路与方法。……   
[关键词]:慈航丹;挥发性成分复方;半仿生提取;分子量≤1000Da提取物;综合指标评判
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:山东中医药大学2010年