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一株解淀粉芽孢杆菌产抗真菌物质的研究

陈成

  HN-06是从土壤中分离获得的一株拮抗植物病原真菌的菌株,对多种植物病原真菌具有较强拮抗作用,具有一定的应用前景。本研究对该菌株进行了鉴定,研究了摇瓶发酵产生抗真菌物质的最佳发酵培养基和发酵条件,对抗真菌物质进行了分离纯化,并研究了其部分理化性质。主要研究结果如下: 通过菌体形态特征观察、生理生化特征分析和16S rDNA序列测定及其系统进化树分析,鉴定HN-06菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。拮抗试验表明HN-06菌株对黑曲霉(Aspergillus niger),稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae),水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani),苦瓜枯萎病菌(cucurbit wilt)等多种植物病原菌具有拮抗作用。 通过单因素实验对HN-06菌株发酵产生抗真菌物质的培养基配方及发酵条件进行了研究,进一步采用L_(16)(4~5)正交实验设计对培养条件进行了优化,最终获得了HN-06菌株发酵产生抗真菌物质的最佳培养基:葡萄糖1.5%,大豆蛋白胨0.5%,无机盐KCl0.05%和MgSO40.07%,吐温-80 0.1%,初始pH7.5。最佳发酵条件:接种量7.5%,,摇床转速200rpm,发酵温度28℃。在最佳条件下,发酵液抗菌活性比初始培养基提高11.3%。 在对抗真菌物质进行硫酸铵盐析时,发现50%的硫酸铵能完全将抗真菌物质沉淀下来,沉淀用超纯水溶解后,进一步用Sephadex G-75柱层析、CM-纤维素离子交换柱层析进行了分离纯化。抗真菌物质对高温比较敏感,60℃以上处理30min可以使其完全失去活性,而较低温度则有利于其活性保持;在酸性条件下容易失活,抑菌效果降低,而在中性偏碱(pH6-10)的条件下抑菌活性高,当pH7-8时,抗菌活性最高。……   
[关键词]:解淀粉芽孢杆菌;抗真菌物质;鉴定;发酵;分离纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南理工大学2010年