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凋亡相关基因及其交互作用与食管鳞癌生物学特性的临床研究

孙伟

  目的:1)通过研究食管鳞癌不同组织部位膜转运蛋白-166(TMEM166)在转录水平的表达与食管鳞癌不同组织部位细胞早期凋亡率,探讨TMEM166与食管鳞癌不同组织部位细胞早期凋亡率的关系;2)通过研究食管鳞癌不同组织部位中程序化细胞死亡蛋白5(PDCD5)在转录和翻译水平的表达及其相关性,探讨PDCD5与食管鳞癌病理特征的关系;3)研究食管鳞癌不同组织部位中TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA与p53蛋白的表达,探讨TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA与p53蛋白与食管鳞癌病理特征的相关性及其在食管鳞癌不同部位组织中的交互作用。方法:1)标本收集:选用新疆医科大学附属肿瘤医院2008年5月~2009年4月手术切除的85例术前未进行抗肿瘤治疗的食管鳞状细胞癌新鲜手术标本,分别留取癌组织、癌旁组织、远癌组织标本;2)按照性别、民族、年龄、临床分期匹配(2009年第七版UICC国际食管癌分期),选择Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期各12例共36例食管鳞癌、远癌组织手术标本,应用流式细胞术、RT-PCR、免疫组化的方法,分别对食管鳞癌组织、远癌组织细胞的早期凋亡率、TMEM166mRNA、TMEM166蛋白表达进行检测;RT-PCR、Western-blot检测食管鳞癌组织不同部位PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的表达,分析PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的相关性及与食管鳞癌的病理特征的关系;3)85例食管鳞癌及远癌组织RT-PCR检测TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA表达,免疫组化检测p53蛋白表达,分析上述基因表达与食管鳞癌的病理学特点及上述基因间的交互作用;4)统计学方法:用SPSS13.0软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,均数比较采用方差分析(ANOVA)、SNK检验(Student-Newman-Keuls)、χ2检验、Pearson积差相关分析;分类资料采用t检验、R×C列联表确切概率法、Spearman等级相关分析。检验水准α=0.05。结果:1)食管鳞癌组织TMEM166 mRNA表达(1.1214±0.2262)低于远癌组织(1.4645±0.3396)(P=0.014);TMEM166基因表达随病变分期增加呈下降趋势(rs=-0.357,P=0.033);2)食管鳞癌组织细胞早期凋亡率(2.1563±0.4740)高于远癌组织(1.6313±0.3121)(P<0.001),食管鳞癌组织细胞早期凋亡率与食管鳞癌临床分期负相关(rs=-0.584,P<0.001),与TMEM166基因表达正相关(r=0.310,P=0.036);3)与远癌组织相比,食管鳞癌组织中TMEM166蛋白亚细胞定位发生改变;4)食管鳞癌组织中PDCD5蛋白表达(0.4387±0.1632)低于远癌组织(0.5659±0.2272),随临床分期增加,其表达量有进一步下调的趋势(rs=-0.678,P<0.001;rs=-0.619,P<0.001);PDCD5mRNA的表达与蛋白表达高度相关(r=0.715,0.781);PDCD5mRNA及蛋白表达水平与食管鳞癌的肿瘤侵润深度、淋巴结分期、分化程度的相关性不均衡;5)食管鳞癌组织细胞中,TMEM166mRNA、PDCD5mRNA表达受抑制,MDM2mRNA、p53在食管鳞癌组织中存在过表达;6)Tip60在食管鳞癌、远癌组织的表达未发现统计学差异(0.7359±0.2489 vs 0.7204±0.1512,P=0.012);7)食管鳞癌肿瘤侵润深度与PDCD5 mRNA负相关(rs=-0.220,P=0.043),与p53蛋白、Tip60mRNA正相关(rs=0.443,0.523;P<0.001)。淋巴结分期与TMEM166、PDCD5mRNA负相关(rs=-0.593,-0.416;P=0.008,0.013):与Tip60、MDM2 mRNA正相关(rs=0.273,0.182;P=0.038,0.009)。肿瘤细胞G分级与TMEM166mRNA负相关(rs=-0.423,P=0.029);与MDM2 mRNA、P53蛋白正相关(rs=0.442,0.299;P=0.027,0.045);8)食管鳞癌组织中TMEM166 mRNA与PDCD5 mRNA正相关(rs=0.516,P<0.001),与Tip60 mRNA、MDM2 mRNA、p53蛋白负相关(rs=-0.236,-0.453,-0.426;P=0.015,<0.001,<0.001);PDCD5 mRNA与Tip60、MDM2mRNA及p53蛋白负相关(rs=-0.417,-0.631,-0.589;P<0.001);Tip60mRNA与MDM2mRNA、p53蛋白正相关(rs=0.388,0.321;P<0.001,0.001);MDM2 mRNA与p53蛋白正相关(rs=0.440,P<0.001);9)食管鳞癌远癌组织中TMEM166 mRNA与PDCD5 mRNA正相关(rs=0.305,P=0.002);PDCD5 mRNA与MDM2mRNA、p53蛋白负相关(rs=-0.315,-0.210;P=0.001,0.031);MDM2 mRNA与p53蛋白正相关(rs=0.221,P=0.023)。结论:1)食管鳞癌组织细胞早期凋亡率增高,TMEM166 mRNA在食管鳞癌的表达受抑制;TMEM166亚细胞定位的改变可能导致TMEMmRNA表达量的下降和该基因功能的变化;2)PDCD5与食管鳞状细胞癌的发生有关,PDCD5mRNA的表达与蛋白表达高度相关;3)食管鳞癌组织细胞中,TMEM166、PDCD5mRNA表达受抑制,MDM2mRNA、p53蛋白存在过表达,与食管鳞癌生物学特点有关;4)Tip60mRNA在食管鳞癌不同组织部位的表达无差异;5)Tip60在食管鳞癌细胞中活性可能与促凋亡基因PDCD5、TMEM166及癌基因MDM2的双重调节有关。……   
[关键词]:食管鳞癌;生物学特性;凋亡相关基因;交互作用
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:新疆医科大学2010年