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柔肝颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β_1/Smads信号转导通路的影响

那坤

   目的:观察柔肝颗粒对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路中Smad3、Smad7及TGF-β1表达的影响,并对其作用机制进行探讨。 方法:Wistar大鼠105只(雄性),体重200g±20g,共分为7组,正常对照组、模型组、秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒高、中、低剂量组,每组15只。采用CCL4复合法进行造模,用柔肝颗粒作为治疗组分高、中、低三种剂量,以秋水仙碱作为西药对照组,以大黄虫丸为中药对照组,同时设正常对照组和模型组,造模同时给予药物治疗。除正常空白组外,其余6组首次用50% CCL4与橄榄油的混合液0.5ml/100g背部皮下注射,以后每隔3天用50 % CCL4与橄榄油的混合液0.3ml/100g背部皮下注射,每周称体重一次,并以此调整药物的剂量。柔肝颗粒低、中、高剂量按成人临床等效量(20g·d)进行换算,分别为3.6g/ kg·d, 7.2g/ kg·d,14.4 g/kg·d,稀释不同浓度,1ml/100g。同样大黄虫丸按(6g·d)进行换算为0.18g/kg·d。秋水仙碱每片1mg,参照成人量1mg·d,按体表面积折合为人的2倍量则为0.108mg/ kg·d,动物灌胃,正常空白组和模型组以同体积蒸馏水灌胃。前两周用高脂低蛋白饲料(80%玉米面+0.5%胆固醇+20%猪油)喂养,5%酒精为唯一饮料,两周以后改为普通饲料。正常空白组皮下注射等量生理盐水给予正常饲料及饮用水。8周后取材、取血。检测肝功AST、ALT、PH、TP,肝纤维化指标HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ,观察肝组织学变化:HE染色和Masson三色胶原染色,同时运用免疫组化法检测TGF-β1以及其信号转导分子Smad3、Smad7的蛋白表达,运用RT-PCR技术检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表达差异。 结果: 1.柔肝颗粒能够降低肝纤维化大鼠血中AST、ALT、PH的水平,升高TP的水平,柔肝颗粒高剂量组最为明显,作用明显优于秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒中、低剂量组(P<0.05);柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 2.柔肝颗粒能够降低肝纤维化大鼠血中HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ的水平,柔肝颗粒高剂量组最为明显,作用明显优于秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒中、低剂量组(P<0.05);柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 3.经HE染色后光镜观察显示:柔肝颗粒高剂量组能够减轻肝纤维化大鼠肝组织中炎症活动度及纤维化程度,作用明显优于秋水仙碱组、柔肝颗粒中、低剂量组、大黄虫丸组(P<0.05),柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 4.经Masson三色胶原染色后,用MIAS图像分析系统计算肝组织胶原面积与胶原面积占总视野面积比的结果显示:柔肝颗粒高剂量组能够减少肝纤维化大鼠肝组织中胶原总面积及胶原面积占总视野面积的比例,作用明显优于秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒中、低剂量组(P<0.05),柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 5.柔肝颗粒能够抑制TGF-β1、Smad3,增强Smad7在肝纤维化大鼠肝组织中的蛋白表达,柔肝颗粒高剂量组最为明显,作用明显优于秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒中、低剂量组(P<0.05),柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 6.柔肝颗粒能够降低TGF-β1、Smad3mRNA在肝纤维化大鼠肝组织中的表达水平,增加Smad7mRNA在肝纤维化大鼠肝组织中的表达水平,柔肝颗粒高剂量组最为明显,作用明显优于秋水仙碱组、大黄虫丸组、柔肝颗粒中、低剂量组(P<0.05),柔肝颗粒中、低剂量组与秋水仙碱组、大黄虫丸组药效相当,四者间无显著性差异(P>0.05)。 7.柔肝颗粒的药效具有一定的剂量依赖关系:高剂量组疗效优于中、低剂量组,中剂量组与低剂量组药效相当,与疗程无明显关系。 结论: 1.柔肝颗粒能明显降低肝纤维化大鼠血中AST、ALT、PH的水平,升高TP的水平,能显著降低肝纤维化大鼠血中HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ的水平。 2.柔肝颗粒能够有效地减少肝纤维化大鼠肝组织中胶原总面积及胶原面积占总视野面积的比例,提示本方有抑制胶原增生以及在肝脏细胞外间质沉积的作用。 3.柔肝颗粒能够抑制肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1以及其信号转导分子Smad3的蛋白表达,增强Smad7的蛋白表达,从而抑制TGF-β1通过信号转导分子Smad3、Smad7促肝纤维化的作用。 4.柔肝颗粒能够降低肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1以及其信号转导分子Smad3mRNA的表达水平,增加Smad7mRNA的表达水平,这可能是柔肝颗粒抗肝纤维化的主要机制之一。……   
[关键词]:柔肝颗粒;肝纤维化;转化生长因子β1;Smads蛋白
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:黑龙江中医药大学2010年