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新型超纯低分子肝素的制备方法研究

刘冬

   低分子肝素(LMWH)是由未分级肝素(UFH)经化学降解或酶降解方法制备的钠盐或钙盐,亦可以说LMWH是普通肝素的一种升级产品,其平均分子量为5000D。当皮下注射LMWH时,其在体内的抗Ⅹa的作用要比普通肝素强得多,因此LMWH的开发与研究越来越被重视,现已成为国内外肝素研究的热点。由于化学降解法的成本较低,且易于实现工业化生产,故在对LMWH的研究领域中大多是研究LMWH的各种化学降解方法。 目前,工业上制备LMWH多采用亚硝酸降解法、β-消去降解法和酶降解法等,而采用过氧化氢降解法制备LMWH的报道比较少见。考虑到以过氧化氢降解法所得LMWH产物的优势在于硫酸化程度较高,成本较低,因此本研究选择以过氧化氢法降解肝素制备LMWH,并结合亲和色谱法对产物进行分离纯化以提高产品中抗Ⅹa成分的比例。这一研究将对LMWH的工业生产起到重要的应用参考价值。 由于降解制备LMWH的肝素原料的质量直接决定了产物的质量,因此为了获得质量符合肝素降解标准的肝素原料,必须事先对肝素原料进行一系列的精制纯化。本研究采用的是盐解法,即经过氧化氢氧化脱色、氯化钠盐解、树脂吸附、沉淀、干燥等工艺步骤对肝素原料进行精制。同时,在整个精制过程中,通过对抗凝效价、pH值、旋光度及分子量和分子量分布的实时监测来确定精制所用的时间,并得到最优工艺条件:氯化钠的质量分数为2%,盐解pH值为9~10,醇沉体积分数为60%,双氧水体积分数为2%。所获得的肝素精品的效价比粗品平均提高了1.3倍,且回收率达85%以上,达到了精制的目的,为下一步的降解制备LMWH提供了符合要求的原料。 为了研制出一种抗Ⅹa效价高,而抗Ⅱa活性低的新型超纯LMWH,本研究用铜离子为催化剂,以降解过程中的温度(A)、时间(B)、过氧化氢的浓度(C)、溶液的pH值(D)为因素,采用正交设计法获得最优工艺条件,并进一步采用GPC法测定产物LMWH的分子量及其分布,用生色底物法测定LMWH的抗Ⅹa值和抗Ⅱa值。结果显示,当过氧化氢浓度为2%,温度为60℃,反应时间为1h,pH值为7时,所获得的LMWH产物的重均分子量为3773D,分子量大于8000D的组分占2.1%,分子量小于2000D的组分占5.4%,抗Ⅹa效价为585IU/mg,抗Ⅱa效价为11IU/mg,二者的比值高达53.2。 本研究建立了一种新的化学降解肝素的工艺,同时结合亲和色谱法筛选抗Ⅹa有效成分,从而开发出一种溶血栓活力高而抗凝血活力低的新型抗血栓肝素类药物。本研究为进一步研究超纯低分子肝素的制备方法打下了基础,也为其在临床上的应用提供了可能性。……   
[关键词]:低分子肝素;制备;高效凝胶渗透色谱;抗Ⅹa;抗Ⅱa;亲和色谱法
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:苏州大学2010年