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低渗诱导栉孔扇贝三倍体及与其它方法的比较

张晨晨

  本文以栉孔扇贝(Chlamys farreri)为研究对象,通过低渗处理抑制栉孔扇贝受精卵第二极体(PB2)的释放产生三倍体。研究中探索了低渗处理的最佳诱导条件,进行了三倍体的诱导和培育以及与其它方法的比较,并通过电镜观察了受精卵经低渗处理后超微结构的变化,以期为多倍体育种理论提供新的实验和实践依据。 研究主要分为以下几个部分: 1、低渗诱导栉孔扇贝三倍体最佳诱导参数的探讨 采用低渗方法,通过不同诱导参数包括:水温20℃时,分别进行不同盐度处理(8-20)、不同起始处理时间(受精后15-40min)和不同持续处理时间(10-25min)的实验。结果表明:以低渗盐度S=14,受精后30min开始处理,持续处理20min,诱导率最高,可达(92.36±2.41)%。 2、栉孔扇贝三倍体的培育 采用低渗方法,以最佳诱导条件诱导栉孔扇贝三倍体,D型幼虫期,处理组幼虫表现出明显的生长优势(P<0.01),不仅生长速度快,而且发育到变态时,个体比二倍体大。初孵三倍体D形幼虫诱导率为90.15%,在往后的幼虫培育中,诱导率逐渐下降,变态附着时减少至60.92%。 3、低渗诱导栉孔扇贝三倍体与其他方法的比较 ①低渗:采用本研究确定的最佳方案;②6-DMAP:浓度60mg/L,40~50%受精卵出现第一极体,处理时间15min;③热休克:30℃,40~50%受精卵出现第一极体,处理时间15min;④冷休克:1℃,40-50%受精卵出现第一极体,处理时间20min。四种方法进行对比,三倍体诱导率以低渗处理组最高为(91.43±4.14)%,6-DMAP处理组次之为(91.25±3.49)%,热休克和冷休克诱导率较低,分别为(25.85±4.94)%和(21.86±2.04)%;低渗的诱导效果与6-DMAP相比无显著差异,P>0.05;低渗与6-DMAP处理组的诱导效果明显优于热休克和冷休克组,差异显著,P<0.01。 4、不同的低渗配置诱导栉孔扇贝三倍体的比较 水温20℃,催产获得同一批精卵,同时受精,分别采用KCl与蒸馏水配成盐度14的处理液、NaCl与蒸馏水配成盐度14的处理液和用盐度31的自然海水与蒸馏水配成盐度14的处理液进行低渗处理,各组均能不同程度地诱导栉孔扇贝受精卵产生三倍体,三倍体诱导率分别为:(90.01±3.27)%、(90.07±2.64)%、(91.43±4.14)%,各组的低渗诱导效果没有显著差异,P>0.05。 5、低渗处理栉孔扇贝受精卵的电镜观察 采用扫描电镜对低渗处理的栉孔扇贝受精卵进行超微结构的观察,对比处理前后受精卵结构的变化,结果表明,低渗处理能够引起受精卵发生变化:诱导组受精卵明显膨胀,体积大于对照组,并且形状不规则;当处理结束放入正常海水浸泡后,受精卵有一定程度的恢复:处理组形状趋于规则,体积与对照组无显著差异。 采用透射电镜对低渗处理的栉孔扇贝受精卵进行超微结构的观察,对比处理前后受精卵结构的变化,结果表明,低渗处理能够引起受精卵发生变化:卵膜破坏,质膜发生皱缩和部分溶解,细胞基质变稀疏,卵黄颗粒皱缩变形;当处理结束放入正常海水浸泡后,受精卵有一定程度的恢复:质膜变得平整,细胞基质比较充盈,卵黄颗粒形状比较规则.……   
[关键词]:栉孔扇贝;三倍体;低渗诱导;受精卵;超微结构
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国海洋大学2010年