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应用胚胎工程技术快速扩繁天祝白牦牛的试验研究

王立斌

  为了加速天祝白牦牛的繁育进程,进行品种的培育和改良,本试验紧密结合动物繁殖生产实践,利用胚胎工程技术对54头天祝白牦牛(供体)的超数排卵、86头黑牦牛(受体)的同期发情以及胚胎回收、胚胎移植和超数排卵及同期发情前后供体和受体体内几种重要生殖激素水平的变化等进行了研究和应用,从而探索出简洁而高效的白牦牛胚胎移植技术体系,为白牦牛的快速繁殖提供理论依据,并形成规模化生产。结果显示: 1、在利用等量法注射国产FSH进行超数排卵的10头牛中,有4头牛反应良好,其中有2头干巴,1头牙日玛和1头头麻,超排的有效率为40%。在超排结束后,这4头牛的卵巢平均大小为(3.8±0.8)×(3.0±1.1)×(2.1±0.6)cm3,卵巢平均增幅为22.47±5.62倍。其中干巴牛的两侧卵巢上共有10个突出于卵巢表面的黄体,另外1头牙日玛和1头头麻的两侧卵巢上分别有2个和4个黄体。其余6头牛的卵巢上有的虽然有卵泡生长发育,但是没有成熟和排卵,卵巢上也没有黄体形成,卵巢的体积有不同程度的增大,卵巢平均增幅为5.73±4.21倍。 2、在利用减量注射法的对比实验中,共处理了10头供体牛,有5头牛的卵巢上有卵泡发育成熟,并且排卵。其中反应较好的是2头干巴,另外2头牙日玛和1头头麻均在一侧的卵巢上各有1个黄体,超数排卵的总有效率为50%。2头干巴牛的卵巢大小平均为(3.6±1.1)×(2.5±1.0)×(1.8±0.8)cm3,增幅为24.15±2.36倍;另外3头牛的卵巢体积平均为(2.5±1.0)×(1.6±1.1)×(1.1±0.6)cm3,平均增幅为15.49±5.23倍。通过直肠检查发现这5头牛共有17个黄体突出于两侧的卵巢表面。反应效果不明显的5头牛的卵巢上有少量卵泡生长,但是没有发育成熟,与处理前相比,它们的卵巢体积也明显增大,平均大小为(1.8±0.8)×(1.4±0.6)×(1.0±0.6)cm3,增幅为3.16±2.80倍。 3、在等量法注射进口FSH的实验中共处理10头供体白牦牛,有5头牛超排效果明显,其中有2头干巴,2头牙日玛和1头头麻,超排的有效率为50%。干巴牛的两侧卵巢上共有9个突出于卵巢表面的黄体,另外2头牙日玛两侧卵巢上共有4个黄体,1头头麻的两侧卵巢上有3个黄体。在试验的10头牛中,平均每头干巴形成黄体3个,每头牙日玛形成黄体1个,每头头麻形成黄体1个。干巴的处理效果明显高于牙日玛和头麻(P<0.05)。 4、在减量法注射进口FSH的实验组中,共处理了12头供体牛,有6头牛的卵巢上有卵泡发育成熟,并且排卵,超排的有效率为50%。其中反应较好的有3头干巴、2头牙日玛和1头头麻。这6头牛共有22个黄体突出于两侧的卵巢表面。另外在处理的12头牛中,干巴牛卵巢上有4个卵泡,牙日玛有2个卵泡,头麻有3个卵泡。 5、应用CIDR和大剂量FSH处理供体白牦牛的实验中,共处理了6头供体白牦牛,其中有3头牛超排反应良好,其余3头牛反应不明显,超排有效率为50%。反应良好的3头牛两侧的卵巢上共有10个黄体,平均每头牛可获得黄体数为1.67个,并且有4个没有排卵的卵泡。 6、在应用PMSG处理的6头供体牛中,有2头牛在96h内出现发情症状,其卵巢上共有6个黄体,平均每头牛的黄体数为1枚,另外有8个没有排卵的卵泡存在,超排的有效率为33%。 7、应用CIDR和FSH重复处理供体白牦牛的结果显示,在处理的6头牛中,有4头牛反应良好,其余2头牛反应不明显,超排有效率为67%。直肠检查可触摸到反应良好的4头牛两侧的卵巢上共有22个黄体突出于表面,平均每头牛可获得黄体数为3.67个,另有没有排卵的卵泡5个。卵巢平均增幅为23.24±5.11倍。 8、在应用CIDR+前列腺素法进行同期发情处理受体黑牦牛的实验中,应用上海产PG处理的26头牛中,有14头牛出现了发情症状,其中在24h内发情的2头,25h~48h内发情的有7头,49h~72h内发情的3头,73h以上发情的2头,同期发情处理的有效率为53.8%,另有12头牛未出现明显的发情症状,但有2头牛的卵巢上触摸到了发育中的卵泡;应用宁波产PG共处理了20头受体牛,撤栓后24h内出现发情的有1头,25h~48h内发情的有6头,49h~72h内发情的3头,73h以上发情的1头,同期发情的有效率为55%,另有9头牛在120h内未见发情症状。应用CIDR+氯前列烯醇法进行受体牛同期发情处理的总有效率为54.3%,受体牛的发情现象主要集中在撤栓后的25~72h之内,占发情总数的76%,24h以内发情的和73h以后发情的各占12%。 9、使用前列腺素法共计处理40头受体牛,分为两组,第一组共18头牛,为一次注射氯前列烯醇组,在处理后的24h内出现发情的有0头,25h~48h内发情的有0头,49h~72h内发情的2头,73h以上发情的2头,总发情率为22.2%;第二组的22头牛在第一次注射氯前列烯醇后,有2头牛在25~72h内出现了发情现象,在对剩余的20头进行第二次注射氯前列烯醇后,24h内出现发情的有1头,25h~48h内发情的有3头,49h~72h内发情的4头,73h以上发情的1头,发情主要集中在注射激素后的25~72h以内,同期发情处理的总有效率为50%。 10、本试验用于冲胚的供体白牦牛共29头,共冲出胚胎128枚,能够用于移植的形态正常的胚胎104枚,另外24枚为等外胚胎。胚胎有效率为81.3%。在104枚正常胚胎中,有85枚桑葚胚,另外19枚为早期囊胚。其中40枚进行常温保存,用于鲜胚移植,另外64枚进行冷冻保存,用于冻胚移植。 11、在胚胎移植过程中,共鲜胚移植了27头经同期发情处理后的受体牛,移植2个月后通过直肠检查诊断有14头牛怀孕,妊娠率为52%。由于1头怀孕牛意外死亡,产犊率为48.1%。将13枚冷冻胚胎分别移植给了13头经同期发情处理过的受体黑牦牛,移植2个月后通过直肠检查诊断有5头牛怀孕并产犊,妊娠率为38.5%。同时在对自然发情黑牦牛的胚胎移植中,用新鲜胚胎移植的5头牛中,有3头牛怀孕,妊娠率为60%,另外6头冷冻胚胎移植的牛中有3头也发生怀孕,妊娠率为50%。 12、在供体牛超数排卵周期中,母畜血清孕酮的浓度在d8前没有明显的变化,保持相对稳定的水平,但在d8后迅速下降,d10降到最低值,以后又开始升高。血清雌二醇的变化趋势刚好相反。 13、受体牛在同期发情处理周期中,血清孕酮和雌二醇的浓度变化与供体牛的变化趋势相似,d10时孕酮的含量降低而雌二醇的含量升高。结果表明,国产FSH与进口FSH在处理供体白牦牛进行超数排卵时,其效果差异不显著;在同等条件下,使用大剂量的FSH对供体白牦牛进行超数排卵,其效果与使用正常剂量FSH的处理效果之间没有明显的差异,其总有效率和平均每头牛形成的黄体数几乎相等;与使用CIDR+FSH进行超数排卵相比,使用PMSG处理供体白牦牛进行超数排卵的效果明显要低;重复进行超数排卵处理的效果显著地高于一次处理的效果,平均每头牛的排卵数也明显地高于一次处理组;采用CIDR+氯前列烯醇进行同期发情处理的总有效率要明显地高于单纯一次使用氯前列烯醇,但与重复两次使用氯前列烯醇的同期发情效果差异不显著;应用鲜胚移植,受体牛的受孕率明显要高于冷冻胚胎的移植妊娠率。并且以自然发情但没有配种的牛作为受体进行胚胎移植,其妊娠率高于利用外源性激素进行同期发情处理过的受体牛。……   
[关键词]:天祝白牦牛;超数排卵;同期发情;胚胎移植
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2009年