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桃再生体系的优化与反义PG基因遗传转化的研究

张亚林

   桃(Prunus persica(L. ) Batsch)是世界性重要果树,我国是桃主产国,产量居世界之首,甘肃省是桃的原产地和最适栽培区之一。桃是典型的呼吸跃变型果实,成熟果实采后很快出现呼吸高峰,果肉迅速变软,给贮藏运输带来极大不便,这是长期制约桃生产的主要问题之一。而通常采用的低温冷藏等方法易造成桃果冷害,结果十分不理想。因此,通过植物基因工程技术控制果实软化,选育出耐贮运的桃新品种是从根本上解决桃贮运难题的有效途径之一。本研究通过反义基因技术特异性抑制果实成熟后PG的表达,有望延迟桃果实的软化,获得耐贮性硬溶质桃新种质。 本研究以甘肃省常栽品种白粉桃为试材,建立了桃遗传转化再生体系,并以白粉桃茎段为材料,在优化桃遗传转化再生体系的基础上,通过根癌农杆菌介导反义PG基因转化,得到了转化植株并用PCR进行了检测。研究主要取得如下结果: 1.以白粉桃幼茎和花后不同时间成熟的果实种胚为外植体,进行桃遗传转化再生体系优化。其幼茎最佳诱导培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+ NAA 0.5mg/L,诱导率可达93.5%。开花75d后的种胚能在MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L上直接诱导分化成苗,诱导分化率可达91.5%。将不定芽用100mg/L IBA浸蘸其基部转移到不含激素的1/2MS培养基中诱导生根,生根率达到78%。 2.用携带有PG基因反义片段和35S启动子的表达载体pCAMBIA2300,转化白粉桃茎段。受体材料预培养3d后,经根癌农杆菌菌液(OD600值0.4)浸染10min后共培养60h,转移至分化培养基MS+6-BA 1.0mg/L +NAA 0.5 mg/L+kan 50mg/L+Cef 250mg/L上诱导产生不定芽,将抗kan的不定芽先后置于含有kan 50mg/L的生长、增殖和生根培养基上继续选择,获得完整植株。经PCR检测初步证明,反义PG基因已导入桃中。……   
[关键词]:;遗传转化再生体系;根癌农杆菌;反义PG基因;转基因植株
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2010年