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小豆再生体系建立及铁吸收基因转化条件初步分析

刘红霞

   小豆再生体系建立是小豆基因功能分析和转基因研究的基础。本文以保278、P254、京农5号、京农6号、京农8号、吉红9号6个小豆品种为材料,对其再生能力进行研究,在此基础上,以京农5号小豆无菌苗下胚轴为外植体,建立了优化的遗传转化体系。取得了如下结果: 1.通过对6个小豆品种再生能力的比较,筛选出再生能力优良、再生频率较高的京农5号,再生频率达到82.5%。 2.建立了小豆再生体系,研究了外植体类型、苗龄和激素浓度对京农5号小豆丛生芽诱导率的影响,得出最佳外植体是下胚轴,最适苗龄为5天,最佳丛生芽诱导培养基为MS+2 mg/L 6-BA+7 g/L琼脂+30g/L蔗糖。 3.初步建立了小豆遗传转化体系,以培养5-6天的京农5号小豆无菌苗下胚轴为外植体,以农杆菌菌株为介体,初步分析了农杆菌介导法转化调控铁吸收基因的适宜条件,优化的基因转化体系如下:Hyg筛选浓度定为25mg/L,抑菌剂选取羧苄青霉素为宜,最初脱菌阶段(一周)浓度为300mg/L,丛生芽诱导阶段浓度为200mg/L;用于转化的浸染时间为15min,菌液浓度OD600=0.3~0.5,外植体预培养时间为2天,共培养3天,乙酰丁香酮浓度为100 mg/L有利于转化。经筛选,得到6株抗Hyg的京农5号转化植株。其中2株经PCR检测,表现为假阳性。……   
[关键词]:小豆;再生体系;根癌农杆菌;转化条件
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2010年