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牦牛血IgG分离纯化工艺研究

金晶

   本研究以新鲜的牦牛血液为原料,采用饱和硫酸铵法,低温无水乙醇沉淀法以及辛酸-硫酸铵法从牦牛血红细胞中提取IgG,通过在不同单因素条件下的提取结果,确定正交试验的参数,对牦牛血IgG提取最佳工艺条件进行了研究,将三种提取IgG方法进行比较,选择出一种提取效率最好的方法,然后采用离子交换和电泳法对牦牛血IgG进行分离纯化并测定。主要研究结果如下: (1)饱和硫酸铵法提取最优工艺参数为BaCl2的添加量是4mL/100mL,饱和(NH4)2SO4溶液百分比浓度为20%,pH值为5.5,温度为30℃,提取的IgG平均含量为24.22mg/mL。 (2)低温无水乙醇法提取最优工艺参数为蒸馏水稀释倍数为3倍,乙醇添加量的百分比浓度为25%,pH值为4.5,NaCl溶液的浓度为0.15mol/L,测得IgG平均含量为9.283mg/mL。 (3)辛酸-硫酸铵法提取最优工艺参数为饱和(NH4)2SO4溶液百分比浓度为45%,辛酸添加比例为1∶25,pH值为5.5,IgG提取的平均含量为20.64mg/mL。 (4)这三种提取方法中饱和硫酸铵法提取效率好,所得IgG含量高,简单快捷,成本低,适合工业化生产;其次为辛酸-硫酸铵法,而低温无水乙醇法相对较差。 (5)用离子交换法对IgG蛋白液进行纯化,得到一个洗脱峰,分布在11~26管之间,蛋白液由之前的淡黄色变为白色液体,可见一些杂蛋白已被过滤,继续用PBS缓冲液洗脱,未发现其他组分。经DEAE cellulose-52纯化的IgG蛋白液浓缩后,采用聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)对其蛋白质进行纯度的鉴定,与纯度为≥95%标准IgG的条带相一致且没有其他蛋白出现。……   
[关键词]:牦牛血;免疫球蛋白G;提取工艺;分离纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:甘肃农业大学2010年