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饲料中四种FQs的LLE-HPCE及诺氟沙星MISPE-HPCE的研究

李慧

   氟喹诺酮类药物(FQs)因具有抗菌谱广、杀菌力强等特点而被广泛应用于畜牧生产中动物疾病的预防及治疗。但是不合理的使用或滥用饲料药物添加剂会造成动物源性食品中药物的残留,通过食物链对人类的健康造成危害。因此,建立饲料中高选择性、多组分、高效、快速的FQs检测方法是十分必要的。 本论文以哺乳猪、肉小鸡等的饲料作为实验材料,选择兽医临床常用的诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)、沙拉沙星(SAR)四种药物作为检测对象,对饲料样品的前处理方法和检测技术进行研究。建立了高效毛细管电泳的同时检测4种FQs的方法;以诺氟沙星为模板,制备了具有高选择性的NOR分子印迹固相萃取(MISPE)柱;建立了饲料中诺氟沙星MISPE-HPCE检测方法,以及饲料中4种FQs的液液萃取—高效毛细管电泳((LLE-HPCE)的检测方法。 1高效毛细管电泳同时检测4种FQs方法的建立 本实验利用高效毛细管电泳仪建立了4种FQs的分离方法,考察了电泳缓冲液的类型、离子浓度、pH值、分离电压和分离温度等条件对4种FQs分离的影响,通过正交试验设计得到了最佳的电泳条件:80mmol/L柠檬酸-80mmol/L柠檬酸钠缓冲液(pH6.5),分离电压为18 kV,分离温度为22℃,紫外检测波长为274nm。四种药物在10min内完全分离,在线性范围为1.56~25μg/mL时,浓度与峰面积的相关系数r=0.9991~0.9995,方法精密度(RSD)为1.36~1.69%(迁移时间)和3.69~5.89%(峰面积),方法平均回收率为84.42~107.5%。 2诺氟沙星分子印迹聚固相萃取柱的制备 以NOR为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,进行热聚合。通过考察溶剂的种类、交联剂的用量、功能单体用量对聚合物结合性能的影响,确定了NOR分子印迹聚合物(MIP)的最佳的制备条件:以80%乙腈为溶剂,n (NOR)∶n (MAA)∶n (EDMA)最佳比例为1∶6∶30。 通过静态平衡吸附法研究了MIP的结合能力和选择特性。当NOR初始浓度C_0为0.2~3.0mmol/L时,MIP和NMIP对NOR的结合量分别为4.57~154.83μmol/g和1.59~80.91μmol/g,结合力实验表明MIP对于NOR具有良好的吸附能力。NOR分子印迹聚合物对于NOR、CIP、ENR和SAR的静态吸附分配系数K_D值分别为59.98、32.87、25.33、22.11mL/g;MIP对于NOR和磺胺间甲氧嘧啶(SMM)的结合量分别为56.24、3.37μmol/g。底物选择性实验表明MIP对于NOR的吸附具有特异性。以合成的MIP为填料,制备诺氟沙星分子印迹固相萃取柱。 3饲料中4种FQs前处理方法的优化 本研究优化了饲料中4种氟喹诺酮类药物液-液萃取的粗提方法,比较了不同提取剂对4种FQs的提取效果。确立了以50%乙腈作为提取剂,在旋涡混合仪上剧烈混合3min,超声波振荡器中超声20min为粗提方法,饲料中4种药物的回收率在85.65~105.6%之间。 4饲料中诺氟沙星MISPE-HPCE检测方法的建立 实验以50%的乙腈作为提取剂,以制备的诺氟沙星MISPE柱为对象,考察了MISPE柱活化溶剂的种类,洗脱剂的种类和用量对样品中NOR回收率的影响。建立了饲料中诺氟沙星MISPE最佳的前处理方法:甲醇和水作为活化溶剂,甲醇/乙酸(8/2)作为洗脱剂,方法的回收率在80.5~86.67%之间,RSD为1.36~4.9%。MISPE法处理的样品的回收率明显高于SPE法,且MISPE对于NOR的专一性较强,处理的样品纯净度高。将饲料中NOR最佳的前处理方法与高效毛细管电泳检测方法联用,确立了饲料中诺氟沙星MISPE-HPCE检测方法。 研究结果表明建立的饲料中诺氟沙星分子印迹固相萃取-高效毛细管电泳检测方法(MISPE-HPCE)选择性好,精密度、准确度高。建立的10min内同时测定4种FQs的高效毛细管方法简便、快速、易行。对于监控饲料中的药物含量,减少动物源性食品中兽药的残留,具有重要的理论和实践意义。为国家建立兽药残留标准化监控体系提供有效数据。……   
[关键词]:饲料;诺氟沙星;高效毛细管电泳;分子印迹固相萃取
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年