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海洋小链霉菌DY2741菌株抗菌活性物质的初步研究

刘伟

   对厦门周边海域采集的不同样品(包括海水、海沙、海贝等),采用稀释平板法分离、纯化、保藏各种海洋微生物,共分离到细菌57株,放线菌17株和霉菌128株。采用滤纸片法以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、啤酒酵母、黑曲霉为测试菌,进行抗菌活性菌种筛选,结果表明从海水和海贝分离出具有抗菌活性的细菌占该类样品分离总细菌数比例较高,分别为69.2%和45.5%;从海水、海沙和海贝中分离出具有抗菌活性的放线菌占从该类样品分离总放线菌数比率高,分别占75.0%、80.0%和80.0%;从海沙和海贝中分离出具有抗菌活性的真菌占从该类样品分离总真菌数比率高,分别为54.5%和57.1%。海洋细菌和放线菌抗两种细菌比率高于其它类型测试菌,而海洋真菌对各测试菌的抗菌比率相对平均。 对一株分离自厦门大屿岛海域潮间带海洋软体动物的放线菌进行研究。经过形态特征、培养特征及生理生化特征可以初步鉴定为链霉菌属(Streptomyces sp.)黄色类群(Flavus),16S rDNA序列与GeneBank比对和系统发育树构建表明其与Streptomyces parvus strain NRRL B-1455T的序列同源性达99%。 为了提高抗菌物质的产量,对菌株发酵培养基组分和发酵条件进行优化。采用管碟法测发酵液的活性,筛选出最适碳源为可溶性淀粉,最适氮源为氯化铵。通过响应面设计Box-Behnken中心组合实验确定培养基最佳组成为可溶性淀粉2.035%,氯化铵0.4425%、氯化钠2.000%;发酵条件优化结果表明最适起始pH 7.0,最适接种菌龄48h,最适接种量为6%,最适装液量为250mL,最适三角瓶装量70mL,最适培养温度为28℃,最适培养时间5d。 菌株DY2741抗菌物质稳定性实验表明:该抗菌物质对pH、UV具有较好的稳定性,高于100℃处理抗菌物质部分失活。 通过对该菌发酵液中抗菌物质的溶解性质测定,可推知该物质极性中等。葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱色谱分离后,经抗菌活性检测发现两个活性峰,其中第2个峰对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性较强。将第2个峰的洗脱液各组分进行薄层色谱分析,选取斑点清晰且单一的组分进行气相色谱-质谱联用分析,总离子流图表明该组分成分单一,根据质谱图与标准谱库比对以及红外光谱分析,初步判断该组分为邻苯二甲酸二丁酯(DBP)。……   
[关键词]:海洋微生物分离;抗菌物质;鉴定;发酵条件;分离纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年