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酶法降低β—乳球蛋白含量的研究

史瑜婷

   本研究以本实验室自制的β-乳球蛋白为原料,以β-乳球蛋白改性及降低β-乳球蛋白含量为目标,优化了一种降解β-乳球蛋白的工艺,建立了一种针对检测乳清小肽类物质的凝胶电泳检测方法,并通过该方法对β-乳球蛋白降解产生的分子量在10kD及以下的小肽进行了定性检测,研究共分三部分。 试验一,由于聚丙烯酰胺凝胶电泳技术在蛋白质分析中,对小分子质量多肽类样品分析效果不佳,针对该技术在小分子乳清肽方面的实际应用,比较了不同浓度的浓缩胶、分离胶,控制电泳过程中的电压电流,以及研究不同染色方法的差异。最后优化建立了一种可用于快速检测10kD及以下的小肽的Tricine-SDS-PAGE方法。 试验二,针对β-乳球蛋白耐蛋白酶水解,单酶对其水解能力有限,水解度不高的问题,研究了碱性蛋白酶分别与木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶组合对β-乳球蛋白进行双酶解,以水解度(DH)和可溶性氮含量(TCA-SN)表征其反应程度,确定碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶为最佳酶解组合。通过正交实验,确定组合最佳反应条件为:酶活添加量为5310U/g的碱性蛋白酶先水解150min后,再加入酶活添加量为4500U/g的木瓜蛋白酶,反应到180min时,水解度可达36.21%。结合论文第一章的Tricine-SDS-PAGE方法对β-乳球蛋白水解液进行电泳分析,了解其降解规律。 试验三,目前β-乳球蛋白改性技术鲜有联合使用,本研究尝试采用热处理与试验二中摸索出的双酶解反应相结合,两种改性技术联合使用。先通过单因素实验确定热处理的最佳反应时间和反应温度,再进行双酶解反应。以水解度(DH)和可溶性氮含量(TCA-SN)为指标,通过Tricine-SDS-PAGE分析双重处理后水解物的小肽分布情况。结果表明在85℃,处理20min后再进行双酶解,β-乳球蛋白的残余率低于1%。……   
[关键词]:β-乳球蛋白;双酶水解;电泳;蛋白酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年