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山茱萸中熊果酸的提取分离及其抗氧化活性研究

温媛媛

   安徽省石台县有丰富的山茱萸资源。山茱萸作为我国传统的名贵中药,具有多种化学成分和药理作用,故具有广阔的开发前景。为了充分有效地利用山茱萸资源,本论文对安徽地区山茱萸的基本成分进行测定,研究了山茱萸中活性物质熊果酸的提取和纯化工艺,同时探讨熊果酸的体外抗氧化作用和动物抗衰老作用。为进一步了解山茱萸药材的药理作用、开发山茱萸药材提供了一定的理论依据。 实验测定山茱萸果实中还原糖、总糖、总有机酸、氮、粗蛋白、粗纤维、熊果酸和齐墩果酸的含量,含量分别为8.362%、16.37%、6.28%、0.4324%、2.7025%、2.32%、0.2722%、0.18%。 采用同时蒸馏萃取(SDE)提取山茱萸中的挥发油,用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对提取出的挥发油进行定性与定量分析,并对文献中测定挥发油的色谱条件等进行优化。结果从山茱萸挥发油中共鉴定出48种主要化合物。含量最高的是棕榈酸(28.86%),其次是亚麻酸甲酯(10.82%)。已定性的组分峰面积之和占总色谱峰面积的91.54%。 通过薄层色谱对山茱萸果实提取物进行定性鉴别,发现果实提取物在与熊果酸标准品相同Rf值的地方出现了相同的紫色斑点。 采用单因素和正交实验对山茱萸中的熊果酸进行超声波提取工艺优化,并进一步用石油醚和四氯化碳对提取液进行除杂。研究结果表明,用超声波辅助法提取熊果酸的纯度最高的工艺条件为:80%乙醇,料液比1∶20,提取时间15min,提取温度35℃。得率最高的工艺条件为:95%乙醇,料液比1∶10,提取时间25min,提取温度35℃。适宜的除杂办法为石油醚洗脱3次,用量为0.2倍于提取液的体积;四氯化碳洗脱3次,用量为0.3倍于提取液的体积。得到粗提液中熊果酸纯度为51.52%。然后采用大孔吸附树脂对山茱萸中熊果酸进行吸附分离纯化,最终得到纯度为79.2%的熊果酸。 采用化学反应法,检测山茱萸中的熊果酸对邻苯三酚自氧化反应产生的超氧阴离子、Fenton反应产生的羟自由基和DPPH自由基的清除作用;将昆明种雄性小鼠随机分为空白组、衰老模型组、阳性对照组、低剂量组和高剂量组,每组10只。给药42d后,摘眼球取血,检测小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平,并测定其胸腺指数和脾脏指数。结果表明:熊果酸具有清除羟基自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的作用,可显著提高小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)含量、降低丙二醛(MDA)含量,显著提高小鼠的胸腺指数和脾脏指数(P <0.05)。由此表明,熊果酸具有明显的抗氧化活性。……   
[关键词]:山茱萸;熊果酸;挥发油;超声波提取;抗氧化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年