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汉黄芩素对人乳腺癌细胞胰岛素样生长因子-1的影响

史志如

   近年来研究表明,胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)能参与肿瘤细胞凋亡调控,是癌基因及抑癌基因发挥生物活性的关键环节,是肿瘤治疗的理想靶点。汉黄芩素(wogonin)是从黄芩根中分离出的一种植物源黄酮类化合物,可以阻断肿瘤细胞的信号转导通路,是一种非常有前途的、具有多靶点的潜在抗肿瘤药物。本论文主要研究汉黄芩素的抗乳腺癌作用与IGF-1信号转导通路的关系及其作用机制,旨在为应用汉黄芩素对乳腺癌进行预防、治疗和药理研究提供理论依据和治疗策略。本实验主要从汉黄芩素体外抗肿瘤作用研究及其对人乳腺癌细胞胰岛素样生长因子-1的影响两方面进行研究。 1.以乳腺癌MCF-7细胞作为体外模型,噻唑盐(MTT)比色法检测汉黄芩素对乳腺癌细胞增殖活性的影响。应用流式细胞仪测定汉黄芩素对MCF-7细胞周期分布的影响。通过检测MCF-7细胞培养基上清中乳酸脱氢酶释放率来考察汉黄芩素的细胞毒性作用。应用相应的检测试剂盒对MCF-7细胞线粒体膜电位和caspase-3的活性进行测定。结果显示:①汉黄芩素能以剂量和时间依赖效应抑制MCF-7细胞株的增殖。②汉黄芩素能将细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞S期的DNA合成,从而诱导MCF-7细胞凋亡。③汉黄芩素能提高线粒体膜的通透性,使线粒体膜电位下降56.55%,促使细胞色素C从线粒体向胞液中释放,使caspase-3的活性提高259.62%,最终导致细胞凋亡。 2.采用MTT比色法测定细胞抑制率。流式细胞仪测定细胞周期分布及细胞凋亡情况。免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中IGF-1和IGFBP-3含量的变化。Western blotting方法检测汉黄芩素对IGF-1介导的PI-3K/Akt途径和MAPK/Erk1/2信号传导途径的影响。结果显示:①汉黄芩素能显著地抑制IGF-1的促增殖作用,且抑制效果呈明显的时间剂量依赖关系。②汉黄芩素能显著地抑制IGF-1的抗细胞凋亡作用,将MCF-7细胞阻遏在G0/G1期。③汉黄芩素抑制IGF-1分泌的同时伴随着对IGFBP-3分泌的促进,随汉黄芩素浓度的增大,其抑制内源性IGF-1的分泌,促进IGFBP-3的分泌作用相应增强。④汉黄芩素可使IGF-1的促Akt蛋白磷酸化水平下降到58.3±9.0%(P﹤0.05),但对Erk1/2蛋白的磷酸化水平并无明显的影响,说明汉黄芩素对MCF-7细胞的抑制作用可能主要是通过影响PI3K通路来实现的。……   
[关键词]:汉黄芩素;乳腺癌;胰岛素样生长因子-1
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:辽宁师范大学2010年