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辣根过氧化物酶与一氧化氮作用机理及其在一氧化氮测定中的应用

强丽

   本文利用紫外吸收光谱法研究了一氧化氮(NO)与辣根过氧化物酶(HRP)的结合,并在此基础上通过二阶导数光谱法建立了一种检测NO的新方法。 在无氧的0.2mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲溶液中,用紫外分光光度计法研究了HRP与NO的结合。根据HRP与NO结合平衡方程,推导出一种评定结合常数的模型方程,并计算出结合常数为(1.55±0.06)×104L/mol,说明在无氧条件下,HRP与NO能形成稳定的复合物。在H2O2和NO存在下,根据HRP催化氧化愈创木酚的初始反应速率证明了NO对HRP的抑制类型,由Lineweaver-Burk法确定为明显的非竞争性抑制并建立了抑制机理。由动力学机理求得结合常数为(5.22±0.06)×104L/mol。两种方法求得的结合常数几乎相等,进一步说明了非抑制竞争机理是合理的。这种由乒乓机理催化双底物的非竞争抑制模型也同样适合NO对其它金属酶相互作用的研究。 根据HRP与NO之间的反应,用二阶导数光谱法建立了一种检测NO的新方法。探讨了HRP浓度和pH值对NO-HRP体系的影响,优化了实验条件。在最佳实验条件下,研究了共存物质如NO_2~-,NO_3~-,H_2O_2对NO浓度检测的影响。建立了标准曲线的回归方程:h=8.89×10~(-2)CNO–1.56×10~(-3),其NO检测的线性浓度范围为0.085-1.3μM,相关系数r=0.9966(n=5)。此方法的相对标准偏差均小于3%,检出限为0.032μM(S/N=3)。该方法成功地应用于检测血清样品中的NO的浓度。……   
[关键词]:一氧化氮;辣根过氧化物酶;结合常数;非竞争性抑制;二阶导数光谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2010年