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狐阴道加德纳氏菌的分离鉴定及快速诊断方法的研究

葛中东

  狐阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis of fox, GVF)是引起狐狸空怀、流产和死胎的主要病原之一。1987年,严忠诚、于国内外首次揭示该病为人畜共患病。狐阴道加德纳氏菌的微生物学特性有别于人体阴道加德纳氏菌,故定名为阴道加德纳氏菌狐亚种。 银黑狐、北极狐、彩狐、赤狐、貉及水貂均易感染;病狐为主要的传染源,通过交配传播,并且怀孕的母狐可传染胎儿;该病一年四季均可发生,但于配种期感染率明显增高;不同品种、不同性别和不同日龄均可感染。近年来,狐阴道加德纳氏菌病的流行呈上升趋势,给我国毛皮动物饲养业中造成了严重的经济损失。 本课题从发生流产的母狐脏器及死胎内分离并鉴定出4株狐阴道加德纳氏菌。并根据狐阴道加德纳氏菌16S r RNA基因设计引物,特异性扩增出437bp的核酸片段,建立了应用PCR检测狐阴道加德纳氏菌的方法;用地高辛标记PCR产物,制备出地高辛标记的核酸探针,建立了地高辛标记探针诊断方法,为狐阴道加德纳氏菌的诊断和流行病学调查提供了良好的技术指导。 试验一狐阴道加德纳氏菌的分离鉴定 本试验对山东省日照虎山镇送检的病死狐样品进行了狐阴道加德纳氏菌的分离及鉴定。对鉴定出的4株狐阴道加德纳氏菌进行药敏试验,结果表明该分离菌对万古霉素、复合磺胺敏感,而对卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶等药物有耐药性。该研究为该病的预防、控制和临床治疗提供了有效的方法。 试验二狐阴道加德纳氏菌PCR诊断方法的建立与应用根据狐阴道加德纳氏菌16S r RNA基因设计1对引物,特异性扩增出437bp的核酸片段,建立了应用PCR检测狐阴道加德纳氏菌的方法。特异性试验结果表明,狐阴道加德纳氏菌能扩增出437bp特异性的核酸片段,而大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,PCR的最低检出限量为500个狐阴道加德纳氏菌。利用建立的PCR检测方法对9株从山东省不同地区分离的疑似菌株进行检测,结果4株为阳性。 试验三狐阴道加德纳氏菌地高辛标记探针诊断方法的建立与应用利用PCR反应扩增出狐阴道加德纳氏菌16S r RNA基因437bp的DNA片段,回收并纯化PCR产物,用地高辛标记,制备出地高辛标记的核酸探针。该探针与狐阴道加德纳氏菌核酸能发生特异性杂交,而与大肠杆菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌细菌的核酸杂交均为阴性。对狐阴道加德纳氏菌的最低检出限量为103个菌,为狐阴道加德纳氏菌的诊断和流行病学调查提供了良好的方法。……   
[关键词]:狐阴道加德纳氏菌;分离鉴定;PCR;地高辛标记探针
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2009年