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盐酸倍他司汀及其注射液有关物质研究

吴家锴

   本文建立盐酸倍他司汀原料、片剂、注射剂含量测定的高效液相色谱法,分别对其进行了方法学研究;用顶空气相色谱法对盐酸倍他司汀原料中的有机溶剂残留进行测定;用高效液相色谱串联质谱的方法对盐酸倍他司汀的有关物质进行研究,分离提纯杂质,进行结构确证;并采用超高效液相色谱串联质谱的方法对盐酸倍他司汀注射液有关物质同时进行定性、定量研究。 本研究工作主要包括以下五个部分: 一、顶空气相色谱法测定盐酸倍他司汀原料中的有机溶剂残留 采用顶空气相色谱法,实现了对异丙醇和三氯甲烷的同时测定,相应浓度范围内线性关系均良好,方法简便易行,结果准确。 二、RP-HPLC法测定盐酸倍他司汀原料及其片剂含量 中国药典采用非水滴定法测定盐酸倍他司汀原料含量,专属性差,共存其它结构类似的杂质将干扰测定结果;其片剂采取紫外分光光度法测定含量。本文采用Diamonsial(?) C18(250 mmx4.6 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-0.01 mol·L-1乙酸铵(0.05%庚烷磺酸钠,0.2%三乙胺,冰乙酸调pH至3.5)(20:80)为流动相,柱温:30℃,流速1.0 mL·min-1,检测波长261nm。以峰面积(A)与标准系列浓度(C)进行线性回归,得回归方程:A=19927C+13958,r=1.0。表明盐酸倍他司汀在1-400mg·L-1的浓度范围内线性关系良好。 耐用性考察换用Agilent 1100高效液相色谱仪;Agilent 8453紫外可见分光光度计,结果无显著性差异。 三、RP-HPLC法测定盐酸倍他司汀注射液的含量 色谱柱:安捷伦AICHROMBond C18 (250 mmx4.6 mm,5μm),以甲醇-0.01mol·L-1乙酸铵(0.2%三乙胺,冰乙酸调pH至3.5)(20:80)为流动相,柱温:30℃,流速0.8 mL·min-1,检测波长261 nm。盐酸倍他司汀在1.05-314.5 mg.L-1的浓度范围内,以峰面积(A)与标准系列浓度(C)进行线性回归,得回归方程:A=32923C+2354.8,r=0.9999。相应浓度范围内线性关系良好。 四、盐酸倍他司汀有关物质研究 利用HPLC-MS对主要有关物质进行分析,结果显示盐酸倍他司汀注射液含有一种分子离子m/z106.20,紫外最大吸收286 nm的杂质,其原料和片剂未检出该杂质。 分别以薄层色谱法和液液萃取法对盐酸倍他司汀热破坏后原料中共存的杂质进行分离制备,综合利用四大谱(UV、IR、MS和NMR)确证了该杂质为2-乙烯基吡啶,首次对盐酸倍他司汀原料热破坏杂质进行结构确认。五、UPLC-MS法测定盐酸倍他司汀注射液有关物质2-乙烯基吡啶含量 首次用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS)法,对盐酸倍他司汀注射液中有关物质2-乙烯基吡啶同时进行定性定量分析,为其原料及注射剂在生产过程中的质量控制提供检测依据。……