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替米沙坦对糖尿病大鼠肾脏组织中内质网应激相关细胞凋亡影响的研究

陈玉凤

   背景和目的 糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病中十分常见和严重的并发症之一,是导致终末期肾脏疾病(end stage renal disease, ESRD)的重要因素之一文献研究表明,细胞凋亡作为一原发和独立的因素在DN的发病过程中起到不可忽视的作用。近年来研究证明,内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)介导的凋亡途径是一种新发现的凋亡途径,在糖尿病的发生发展中可能起一定的作用。因此,抗ERS治疗成为了治疗糖尿病及其并发症的一个新选择。血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)被普遍用于治疗DN,通过降低血压和减少尿蛋白,延缓DN的发展。但其具体作用机制尚未完全明了。 本试验通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病大鼠模型,根据各组大鼠一般生化指标的变化和肾组织中ERS介导的凋亡途径中相关的因子GRP78、CHOP和caspase12的表达情况,来探讨ERS介导的凋亡在DN发生发展中的作用以及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂替米沙坦对糖尿病大鼠ERS相关肾脏细胞凋亡系统的干预和影响。 材料与方法 SD雄性健康大鼠48只,正常对照组(NC组)(n=10只)。38只大鼠采用腹腔注射STZ 60mg/kg,制备糖尿病大鼠模型(其中8只大鼠造模未成功予以剔除),造模成功大鼠分成二组:糖尿病组(DM组)(n=15只)、替米沙坦干预组(DT组)(n=15只)。各组大鼠给予普通饲料喂养,DT组大鼠每日上午给与替米沙坦(10mg/kg,溶于蒸馏水中)灌胃,DM组和NC组大鼠只给与等量蒸馏水灌胃,共12周。试验结束后测量各组大鼠的体重、右肾的重量和24h尿蛋白排泄量,并抽取腹主动脉血检测血糖、血胰岛素、血肌酐等生化指标;同时留取适量肾脏组织分别做免疫组化及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测GRP78、caspase12和CHOP蛋白及mRNA的表达水平;采用原位末端标记凋亡细胞(TUNEL)法检测肾脏细胞凋亡程度。并对数据进行统计学分析,选取α=0.05作为检验水准。 结果 1.DM模型建成后,6只大鼠因血糖下降不达标被剔除。实验过程中DM组2只大鼠死亡,DT组1只死亡,最终共31只完成实验。DM组大鼠血糖较NC组明显增高(P<0.05)。HE染色:DM组大鼠肾小球肥大,血管腔受压,基底膜增厚,系膜区增宽和细胞外基质增多,部分肾小球体积缩小、出现硬化;Masson染色:DM大鼠肾组织内胶原组织明显增多,粗大胶原纤维相互连接成网状,排列紊乱,分布不匀。DM组24h尿蛋白显著高于NC组(P<0.05)。血肌酐的水平在DM组也明显升高(P<0.05)。此结果提示,1型糖尿病DN模型建造成功。 2.TUNEL法检测肾脏细胞的凋亡,结果显示:阳性染色信号定位于肾脏细胞核内,呈棕黄色,体积等于或小于正常细胞核;NC组偶见细胞凋亡,凋亡指数为(2.71±0.19)%,DM组凋亡指数为(25.75±2.72)%,DM组显著高于NC组(P<0.05)。相关分析显示,NC组和DM组中24h尿蛋白与肾脏细胞凋亡指数之间均呈显著正相关(均P<0.05)。 3.与NC组相比较,DM组的GRP78、caspase12蛋白及其mRNA表达和CHOPmRNA的表达均显著增高(P<0.05)。NC组和DM组GRP78、caspase12及CHOP mRNA及蛋白的表达程度与肾脏细胞凋亡指数之间均呈显著正相关(均P<0.05)。 4.与NC组相比较,DT组大鼠肾小球和肾小管的病理变化及胶原纤维化明显减轻,24h尿蛋白值、血肌酐值显著降低(P<0.05),TUNEL法检测DT组大鼠肾脏细胞的凋亡程度也显著减少(P<0.05)。同时,GRP78、Caspase12、CHOP蛋白及其mRNA的表达水平均较DM组有明显的降低(P<0.05)。另外,DT组24h尿蛋白与肾脏细胞凋亡指数之间也呈显著正相关(P<0.05)。对GRP78、caspase12和CHOP mRNA及蛋白与肾脏细胞凋亡指数之间进行相关性分析,结果亦显示它们之间存在显著正相关(均P<0.05)。 结论 1.GRP78、CHOP、Caspase12 mRAN及其蛋白在DM大鼠肾脏组织中表达异常增加,且与肾脏细胞凋亡指数之间呈显著正相关,而肾脏细胞凋亡指数与24h尿蛋白之间也呈显著正相关,提示ERS介导的凋亡途径在DN的发生发展中起着重要作用。 2.替米沙坦可能通过降低肾脏组织中ERS相关细胞凋亡因子GRP78、CHOP、Caspasel2蛋白及其mRNA的表达,减少肾脏细胞的凋亡,而起到延缓DN发生发展的作用。……   
[关键词]:糖尿病肾病;内质网应激;细胞凋亡;替米沙坦
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:郑州大学2010年