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马铃薯中酚类物质的提取、纯化及检测方法研究

周胜男

   马铃薯是世界四大粮食作物之一。人们日常生活和生产中多用到的是去皮马铃薯,而皮则作为废弃物丢弃,殊不知皮和渣中所含功能性生物活性成分的价值。本文研究了马铃薯中主要生物活性物质-酚类物质的提取工艺和分离纯化工艺,得出相应的工艺参数,建立了一种快速分离检测酚类物质的方法―高效毛细管电泳法。 通过薄层色谱(Thin Layer Chromatography,TLC)对马铃薯酚类提取物进行定性鉴别,显示粗提物样品在与绿原酸、咖啡酸等标准品相同R_f值的地方出现了相同的蓝色斑点,说明马铃薯提取物中含有酚类物质。 分别采用冷凝回流提取法、恒温水浴摇床振荡提取法和超声波辅助提取法对马铃薯酚类物质进行提取,比较三种方法的提取效率。结果表明,三种提取方法中以超声波辅助提取法效率最高,效果最好,适宜提取工艺参数:pH=3的70%乙醇水溶液,料液比为1:12,在45℃,175W功率的条件下提取3次,每次提取40min。 采用柱层析分离法进行分离纯化,通过静态吸附和解析试验对比大孔树脂和聚酰胺两种填料,结果显示采用聚酰胺作为填料时吸附和解析效果较佳。进而通过静态试验和动态试验考察了pH值、上样浓度、流速等因素对吸附和解析的影响。实验结果表明:吸附和解析的pH都为3;总酚最佳上样浓度为0.9711mg/mL;上样流速2.0mL/min;用6~8倍柱体积50%乙醇洗脱液以2.0mL/min流速洗脱。马铃薯酚类物质粗提液的纯度仅为7.57%,而经聚酰胺纯化后的酚类物质纯度达到71.01%,说明采用本方法富集、纯化马铃薯酚类物质的工艺是可行的。 建立了高效毛细管电泳同时分离测定芦丁、槲皮素、绿原酸、咖啡酸、没食子酸和原儿茶酸6种酚类物质的方法。考察了缓冲液种类、离子浓度和pH、分离电压、运行温度等电泳参数,确立了最佳的电泳条件:缓冲液为20mmol/L磷酸二氢钠-20 mmol/L硼砂,pH7.5,分离电压为20kV,运行温度为30℃,紫外检测波长214nm。结果表明,6种物质在12min内得到完全分离,且各组分质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,R~2为0.9987~0.9874。方法精密度实验中,迁移时间的RSD为0.280%~0.425%,峰面积的RSD为5.228%~8.506%,回收率为85.11%~101.98%。通过毛细管电泳测得马铃薯酚类物质主要为绿原酸和咖啡酸两种,其中绿原酸含量为330.18μg/g,咖啡酸含量为89.33μg/g,马铃薯中酚类物质总含量为419.51μg/g。……   
[关键词]:马铃薯;酚类物质;超声波辅助萃取;聚酰胺;毛细管电泳法
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:安徽农业大学2010年