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机械力扩张小鼠腭中缝骨组织改建过程中血管新生的研究

穆静文

  第一部分机械力扩张作用下小鼠腭中缝组织结构变化的系列观察 目的观察扩张力作用下小鼠腭中缝牵张成骨的组织形态学变化,胶原纤维的分布,了解扩弓后腭中缝组织的反应及胶原纤维分布在腭中缝机械力扩张骨改建过程中的意义。 方法选用6周龄健康雄性C57BL/6小鼠60只,随机分成对照1d、3d、7d、14d、28d组和实验加力1d、3d、7d、14d、28d组,每组各6只。用两眼簧扩弓器施加扩张力(0.56N)于实验组小鼠的腭中缝。于加力后1d、3d、7d、14d、28d通过苏木素-伊红染色观察小鼠腭中缝组织形态学的改变,Masson染色观察腭中缝组织中软骨,胶原纤维及弹力纤维的变化。 结果Masson染色显示扩弓第1天,腭中缝中间的弹力纤维层与两侧软骨细胞带界限模糊不清腭中缝中层已全部为篮染的胶原纤维,两侧的软骨细胞减少并各向两边迁移,细胞呈椭圆形第14天较扩弓第7天,腭中缝明显增宽,腭骨两侧类骨质形成,软骨细胞增多形态扁圆腭中缝组织恢复原来结构腭骨两侧大量新骨形成,软骨细胞形态恢复圆形到扩张第28天,缝中间的胶原纤维延扩张力的方向排列。 结论对腭中缝施加扩张力能够促使缝组织中胶原纤维的含量显著增加,其可以诱导成骨细胞的分化及骨基质的矿化;并可能诱导血管的新生促进了腭中缝扩张的骨改建。 第二部分机械力扩张小鼠腭中缝骨组织改建过程中APN﹑THBS1的表达意义 目的观察小鼠腭中缝在机械扩张力作用的不同阶段APN﹑THBS1表达的变化规律,探讨其在腭中缝机械力扩张组织改建过程中的意义。 方法选用6周龄健康雄性C57BL/6小鼠60只,随机分成对照1d、3d、7d、14d、28d组和实验加力1d、3d、7d、14d、28d组,每组各3只。用两眼簧扩弓器施加扩张力(0.56N)于实验加力组小鼠的腭中缝。于加力后1d、3d、7d、14d、28d通过石蜡切片免疫组织化学对APN﹑THBS1进行组织定位,采用Western免疫印迹法半定量鉴定APN﹑THBS1的表达情况,观察两者的表达规律并与未施力的对照组比较。 结果免疫组织化学染色显示APN主要定位于间充质细胞和软骨细胞膜上,各对照组均有弱阳性表达,第1天实验组即呈强阳性表达,第3天实验组相比对照组阳性面积大但低于第一天实验组,实验组第7天阳性面积明显比对照组大,第14天明显下降但仍高于对照组,第28天又略有下降但仍高于对照组。THBS1主要定位于软骨细胞及成纤维细胞膜及细胞外间质。实验组和对照组呈阳性表达(图2-14,15,),第3天开始实验组THBS1阳性面积明显达到峰值(图2-16,17)第14天和28天阳性面积下降但仍高于对照组(图2-18,19,20,21,22,23)。 Western-blot分析显示各组小鼠腭中缝组织中APN的表达量。实验各组APN表达水平显著高于对照组且差异具有统计学意义。实验组第1天﹑第3天表达量间无显著性差异,但第7天表达水平显著升高,第14天与第28天表达呈下降,差异具有统计学意义,但是两组之间的差异没有统计学意义。实验各组THBS1表达水平显著高于对照组且差异具有统计学意义。实验组第3天表达量最高,到第14天THBS1表达量显著下降但仍高于对照组,第28天表达量又低于14天,但仍略高于对照组,差异有统计学意义。对照组各天数间表达量差异无统计学意义。 结论对小鼠腭中缝施加扩张力的情况下能够诱导APN的表达增加,其在时间与空间的数量和分布差异说明APN在腭中缝扩张新骨改建过程中具有重要意义;THBS1对新生血管的抑制作用存在于小鼠腭中缝扩张过程中,在腭中缝扩张改建过程的生理平衡调控机制中有重要意义。……   
[关键词]:Masson染色;胶原纤维;腭中缝;机械扩张力;腭中缝;小鼠;APN;THBS1
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2010年