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芍药苷抑制NF-КB活性对人胃癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

吴昊

  背景和目的:胃癌是目前最常见的恶性肿瘤之一。主要治疗手段为手术和化疗,但是许多患者就诊时往往已处于晚期,失去手术机会,此时化疗成为主要的姑息治疗手段。近年来随着新一代化疗药物的应用,其疗效得到了一定的提高,但生存期的改善仍不能令人满意。研究发现,胃癌对化疗药物的耐药是治疗失败的主要原因,而在众多耐药机制中,胃癌细胞对凋亡的抵抗占有重要地位。所以深入研究凋亡发生的机制,寻找逆转肿瘤细胞凋亡抵抗的分子靶点成为目前研究的热点之一。NF-κB信号转导通路因其在凋亡抵抗中可能的重要作用而备受关注。NF-κB作为一种普遍存在的转录因子,可介导炎症反应、免疫应答等,近年来研究表明它与肿瘤的发生发展以及凋亡抑制和诱导耐药关系密切。寻找天然的NF-κB活性抑制剂,阻断NF-κB抑制细胞凋亡的信号转导途径,将有可能为恶性肿瘤的治疗提供有应用前景的靶向治疗手段。基于NF-κB可介导炎症反应的事实,我们研究了具有抗炎、抗风湿作用的中药有效成分芍药苷对NF-κB活性的影响,以及对胃癌细胞增殖和凋亡的效应,初步探讨了芍药苷影响NF-κB活性的作用机制。 方法:1. MTT法检测芍药苷单独应用或联合化疗药物5-FU对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响。2.应用Western Blot方法检测各实验组胞核NF-κB表达情况,并检测NF-κB信号通路上游的多种胞浆蛋白表达。3.应用胞核NF-κB活性检测手段(ELISA法)进一步确定胞核内NF-κB的表达情况。4.免疫荧光法直观观察应用芍药苷前后NF-κB移位情况。5. RT-PCR检测应用芍药苷前后IκBαmRNA的表达。6.流式细胞仪检测芍药苷单独应用或与化疗药物5-FU联合应用对肿瘤细胞凋亡的影响。 结果:1.不同浓度芍药苷、5-FU作用于胃癌SGC-7901细胞后,对细胞的增殖抑制率的影响呈现浓度依赖性。浓度越高,细胞增殖抑制率则越高。联合用药比单独用药细胞抑制率明显上升。芍药苷100μg/ml培养48小时细胞抑制率为17%,5-FU 5μg/ml细胞抑制率为8%。而两者联合细胞抑制率为29%。2.芍药苷对胃癌SGC-7901细胞胞核NF-κB表达有明确的抑制作用,Western Blot以及胞核NF-κB活性检测结果均显示这种抑制存在着时间及剂量依赖现象。芍药苷100μg/ml培养48小时后细胞核内NF-κB的表达量仅为正常对照的一半(P<0.01)。免疫荧光法也进一步证明芍药苷应用前后NF-κB荧光强度的变化。3.针对NF-κB信号途径上游分子的检测表明,应用芍药苷后IκBα表达上调,P-IκBα表达下调。而更上游的IKKα表达无变化。4.RT-PCR法检测不同药物组IκBαmRNA的表达情况未发现显著差异(P>0.05)。5.流式细胞术检测结果显示芍药苷对5-FU诱导的肿瘤细胞凋亡有明显的促进作用,对照组细胞凋亡率约为4.9%,单用5-FU时为7.4%,单用芍药苷为11.9%,联合用药组凋亡率为25.9%(P<0.01)。 结论:1.芍药苷可通过抑制NF-κB信号转导通路增强5-FU诱导的细胞增殖抑制和凋亡效应。2.该药产生的效应是通过阻滞IκBα的磷酸化,从而抑制了NF-κB活化所致,但这种作用可能并非通过IKKα介导。3. IκBα蛋白水平的上调与其转录水平无关,具体作用机制尚须进一步研究。本研究结果提示芍药苷作为一种作用于NF-κB的抑制剂可能会在诱导肿瘤凋亡的治疗方面具有临床应用前景。……   
[关键词]:芍药苷;NF-κB;IκBα;胃癌细胞;凋亡
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京医科大学2008年