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鸡毒霉形体黏附素蛋白黏附特性及粘膜免疫研究

王晓丽

   鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum, MG)是引起禽类慢性呼吸道病(Chronic Respiratory Disease, CRD)的病原,虽然不会引起鸡群大量死亡,但是可导致鸡群产蛋量下降、孵化率、饲料转化率降低等,给养禽业带来了严重的经济损失。 目前该病的主要防治措施是接种疫苗,由于弱毒苗和灭活苗本身存在一些不足,因此新型基因疫苗的研制备受关注。研究表明,MG是借助其表面的黏附素蛋白(protein of Mycoplsma gallisepticum Adhesin, pMGA)吸附到宿主细胞上,进而发挥致病作用。pMGA是一种主要的原生质膜蛋白,具有血凝素活性。本研究对实验室保存的MG-HS株pMGA1.2基因进行表达,经western-blot检测和体外气管纤毛吸附试验研究其免疫原性和黏附特性。采用原核表达的重组霍乱毒素B亚基(Cholera toxin B subunit, CTB) (rCTB)作为粘膜免疫佐剂和pMGA1.2重组蛋白(rpMGA1.2)一起免疫实验动物,并对其免疫效果进行了评价。主要试验结果如下: 1.MG黏附素蛋白基因(pMGA1.2)和霍乱毒素B亚基基因(ctb)的表达 表达纯化了rpMGA1.2和rCTB蛋白。经SDS-PAGE电泳分析,其表达产物条带大小均与预期的一致(rpMGA1.2约92.0Kda,rCTB约38.0KDa),其中rpMGA1.2主要以可溶性蛋白的形式存在,而rCTB主要以包涵体的形式存在。经Western blot和神经节苷脂(GM1)结合试验证明:rpMGA1.2和rCTB都具有良好的免疫学活性。 2.鸡毒霉形体黏附素蛋白pMGA1.2黏附特性研究 鸡胚气管环在含10%犊牛血清的DMEM培养基中生长状态良好,电镜扫描结果显示当rpMGA1.2使用剂量为100μg时对MG导致的鸡气管纤毛脱落抑制作用最好,说明rpMGA1.2参与了MG的吸附过程。 3.鸡毒霉形体黏附素蛋白pMGA1.2粘膜免疫效果测定 rpMGA1.2混合粘膜免疫佐剂rCTB通过滴鼻点眼的途径共同免疫试验鸡,ELISA结果表明:免疫后血清中能产生特异性的IgG及sIgA抗体,但是sIgA抗体水平较低;鼻冲洗液和气管冲洗液中rCTB+rpMGA1.2组与rpMGA1.2组sIgA抗体水平差异显著(P<0.05),rCTB+rpMGA1.2不同剂量组(10gg,20μg)间差异不显著,且鼻冲洗液中sIgA抗体水平较气管冲洗液略高。攻毒试验结果:rCTB+rpMGA1.2 10μg组效果较好,保护率可达到77%。说明表达蛋白pMGA1.2能刺激机体引起免疫反应,具有作为亚单位疫苗的应用潜力。……   
[关键词]:鸡毒霉形体;黏附素蛋白;pMGA1.2;粘膜免疫
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年