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产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究

段龙川

   猪进行性萎缩性鼻炎(Swine progressive atrophic rhinitis, PAR),主要是由D型产毒素多杀性巴氏杆菌(toxigenic Pasteurella multocida, T+Pm)引起的猪的呼吸道疾病,该病给养猪业造成较大经济损失。 疫苗免疫是预防该病的主要手段,随着分子生物学的发展,新型的基因工程疫苗被广泛用于动物传染病的预防。本研究以徐引弟博士构建的沙门氏菌缺失株C501为载体,将产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因C端免疫原性片段通过构建重组质粒电转化C501,获得产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗菌株。主要研究内容如下: 1.重组菌株的构建及其生物学特性的研究 参照产毒素多杀性巴氏杆菌toxA基因序列(NO. AY864768),设计引物扩增toxA基因C端,构建无抗性原核表达质粒pYA-toxAc,并电转沙门氏菌C501,获得重组菌株C501 (pYA-toxAc)。该重组菌株可以稳定遗传表达外源基因片段,且表达产物不影响沙门氏菌自身生长特性、表型及生化特性;重组菌株毒力较亲本株C500下降约2倍左右。 2.重组菌株对小鼠的免疫保护效力研究 将重组菌株C501 (pYA-toxAc)分别通过口服和皮下注射两种方式免疫小鼠,间隔14天加强免疫一次,第28天分别用猪霍乱沙门氏菌C78-1株10×LD50口服攻毒和产毒素多杀性巴氏杆菌HN-13株5×LD50腹腔攻毒。试验结果表明,皮下免疫重组菌可以刺激小鼠产生针对沙门氏菌和toxAc较高的IgG抗体和较低的IgA抗体;口服免疫获得较高的IgA抗体,而IgG抗体较低。无论口服或皮下免疫小鼠均可以对猪霍乱沙门氏菌的攻击提供100%保护,皮下方式免疫小鼠对产毒巴氏杆菌的攻击为80%的保护,口服组为60%的保护,对照组80%死亡。 3.重组菌株对猪的免疫试验 选取10头产毒素多杀性巴氏杆菌与沙门氏菌血清学和病原学均为阴性的断奶仔猪,随机分为2组,每组5头。以3×109CFU/头的剂量颈部肌肉注射免疫,间隔14天进行第二次免疫,对照组采用20%氢氧化铝作为空白对照。首免、二免后14天,分别采血,检测血清中沙门氏菌和产生针对toxAc的IgG抗体水平。试验结果表明免疫猪可以产生针对沙门氏菌和toxAc外源抗原的IgG抗体,OD(630)值分别为2.135和1.351。……   
[关键词]:产毒素多杀性巴氏杆菌;沙门氏菌;重组菌株;生物学特性
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年