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鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆

许媛媛

   鸭瘟(Duck plague, DP)又名鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis, DVE),是鸭、鹅和其他雁形目禽类的一种急性败血性、接触性传染病,其发病率和死亡率都非常高,给全世界养鸭业带来了巨大的经济损失。 本试验将108羽35日龄樱桃谷鸭随机分为两组:对照组36羽,试验组72羽,分别隔离饲养,试验组每羽腿部肌肉注射0.1mL病毒液,复制鸭瘟病理模型。对所建立的病理模型进行临床症状观察、病理组织学检查、超微结构变化观察,同时对11项血清生理生化指标ALT、AST、ALT/AST、LD、AMY、ALB、GLB、TP、A/G、ALP、CK及皮质醇(Cor)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)两项细胞因子等方法对所建立的病理模型进行动态变化。本研究同时克隆出樱桃谷鸭和麻鸭CD4 ORF基因序列,并对其进行分析,为进一步研究CD4+T淋巴细胞在阐明禽类疫病的免疫机理奠定基础。 人工感染鸭瘟病毒的试验鸭临床症状表现为:感染后4d病鸭食欲减退,发生顽固性下痢,粪便呈绿色或灰白色,泄殖腔红肿,肛门外翻,病鸭眼角流出澄清透明的浆液性分泌物,眼周围呈现“泪斑”,鼻腔流出稀薄或黏稠的分泌物,呼吸困难,并开始出现死亡;感染5d后有的鸭头颈肿大,死亡率为48.6%。 对人工感染鸭瘟病毒的试验鸭外周血生理生化指标的测定结果表明,病毒感染对外周血各项指标都有一定的影响,在感染后,感染组鸭血清中ALT、AST、LD、AMY的含量始终明显高于对照组;感染组鸭血清中ALT/AST、ALB、GLB、TP、A/G含量始终低于对照组;ALP、CK含量感染组较对照组比较先升高后下降;而TNF-α和Cor无明显差异。 感染组鸭的组织学检查结果为:肝脏在感染初期肝细胞发生水泡变性、脂肪变性,感染后3d组织出现坏死,后期坏死进一步加剧;感染后黏膜上皮变薄甚至消失,随着病情的发展,组织发生充血、出血、坏死;肠道感染后2d肌层出现淋巴滤泡,5d时淋巴滤泡细胞数量减少,并在出现淋巴滤泡的地方发生出血、坏死;肾脏在感染后肾小管上皮细胞发生坏死,有的上皮细胞从基底膜脱落到管腔中,感染后期组织充血、出血,并伴有炎性细胞浸润;胰腺在感染后4d组织发生坏死,且随着病情的发展,坏死面积逐渐增大;动物感染后心肌的变化不十分明显,在感染后3d出现了少量的出血现象,并在感染后4d发生心内膜出血;脾脏、胸腺、法氏囊均在感染后出现淋巴细胞数量减少的现象,同时在感染后期,组织发生坏死。 脾脏、胸腺超微结构观察结果:感染1d后,在感染鸭脾脏中观察到吞噬了异物的巨噬细胞,感染后2d内质网有的发生扩张,后期发现多个坏死的细胞,并在感染5d时观察到吞噬了坏死细胞的巨噬细胞;感染1d后,即在感染鸭胸腺胞质内发现病毒颗粒,感染后3d观察到异嗜性粒细胞正在伸出伪足吞噬坏死细胞残留的碎片,后期坏死细胞增多,并在细胞内、外均发现了病毒颗粒的存在。 根据GeneBank中收录的北京鸭CD4基因序列(AF378701)设计合成一对特异性引物,分别对樱桃谷鸭和麻鸭CD4 ORF基因进行扩增,并测定其基因序列,将其登陆到GeneBank,登录号分别为FJ527911,FJ527912。应用BLAST和DNASTAR等生物学软件对三种鸭CD4基因序列进行比对,分析表明:樱桃谷鸭、麻鸭、北京鸭间CD4基因ORF序列之间的同源性均为99%。……   
[关键词]:鸭瘟病毒;病理变化;CD4
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年