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基于量子点的荧光免疫分析在几种农兽药残留检测中的应用研究

陈翊平

   量子点(QDs)是近年发展起来的一种新型荧光纳米材料,与传统有机荧光染料相比,具有许多优良的荧光性能,在生物分析化学、荧光免疫学、基因组学、蛋白质组学和细胞生物学等领域显示出广阔的应用前景,已经引起人们的广泛关注。 本论文在简要综述量子点技术发展的基础上,以量子点制备、纯化、性能表征及在农药和兽药残留检测中应用为主线,主要开展以下几个方面工作。 一、基于量子点和羊抗小鼠二抗的偶联物,建立一种灵敏、快速检测饮用水中毒死蜱的荧光免疫分析法(cFLISA)。 基于量子点和二抗偶联物的荧光免疫分析法(cFLISA)中的线性检测范围为15.2-205.5ng mL-1,灵敏度(IC50)为50.2ng mL-1,检出限(LOD)为8.2ng mL-1。 荧光免疫分析法(cFLISA)与传统酶联免疫分析法(ELISA)相比,不仅灵敏度提高1.5倍,检测时间也缩短0.5h。 在实际水样检测中,荧光免疫分析法(cFLISA)的检测结果与酶联免疫分析法(ELISA)、高效液相色谱方法(HPLC)的检测结果相符,表明该方法可用于环境和食品中农药残留的检测和大规模样品筛查。 二、利用水相法合成碲化镉量子点,并制备相应量子点-链霉亲和素荧光探针(QDs-SA),建立基于QDs-SA偶联物的新型荧光免疫分析方法(QDs-SA-cFLISA)并应用于毒死蜱的检测。 采用水相合成法,以巯基丙酸为稳定剂,制备表面带羧基的水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs);其激发光谱宽且连续,发射光谱比较窄而对称,粒径比较均一荧光性质稳定,具有良好的光学性能。 将表面带羧基的水溶性碲化镉量子点(CdTe QDs)和链霉亲和素(SA)偶联,制备量子点-链霉亲和素荧光探针(QDs-SA),作为信号系统和信号放大系统,建立新型的荧光免疫分析方法(QDs-SA-cFLISA)。 荧光免疫分析方法(QDs-SA-cFLISA)与常规酶联免疫分析法(ELISA)相比,量子点-链霉亲和素荧光探针(QDs-SA)取代常规酶联免疫分析法(ELISA)中的酶标抗体,灵敏度提高5.5倍,检测时间缩短1h。 在实际水样检测中,荧光免疫分析方法(QDs-SA-cFLISA)的检测结果与酶联免疫分析法(ELISA、高效液相色谱方法(HPLC)的检测结果相符,表明该方法可用于饮用水中毒死蜱残留的检测。 三、小分子直接包被技术和量子点(QDs)纳米材料相结合,建立灵敏、快速的免疫分析方法并用于虾仁中氯霉素的检测。 酶标板表面用戊二醛(GA)处理,引入醛基与氨基化氯霉素直接偶联,将氯霉素小分子直接包被在酶标板上,并结合生物素化一抗和量子点-链霉亲和素荧光探针(QDs-SA),建立基于小分子半抗原直接包被方式和量子点(QDs)荧光探针结合的新型荧光免疫分析方法(QDs-SA-direct Hap coated cFLISA)。 荧光免疫分析方法(QDs-SA-direct Hap coated cFLISA)的直接包被模式与传统酶联免疫分析法(ELISA)的完全抗原包被模式相比,抗原-抗体结合效率高且稳定性强,不仅灵敏度提高5倍,检测时间也缩短1h。 在实际样品虾仁检测中,荧光免疫分析方法(QDs-SA-direct Hap coated cFLISA)的检测结果与酶联免疫分析法(ELISA、高效液相色谱方法(HPLC)的检测结果相吻合,表明该方法可作为传统酶联免疫分析法(ELISA)重要的补充,也用于食品和环境中兽药残留的检测。……   
[关键词]:量子点;荧光免疫分析;小分子直接包被;毒死蜱;氯霉素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年