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ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响

高红梅

   仔猪早期断奶技术是国内外集约化和规模化养猪生产中普遍关注和采用的先进技术。仔猪在断奶前后胃肠道微生物区系发生了很大变化。目前研究认为仔猪早期断奶后产生腹泻这一临床症状的主要原因是幼龄仔猪消化道组织及其功能发育尚未完全成熟,断奶应激易导致仔猪胃肠道功能紊乱,使仔猪胃、肠道屏障受损,从而导致仔猪“断奶综合征”的发生。研究表明:肠黏膜上皮的完整性是仔猪早期断奶综合征发生的关键。肠黏膜屏障包括完整的肠上皮细胞及其细胞间连接所构成的机械屏障、肠道正常微生物群所构成的生物屏障和肠道相关淋巴样组织及其分泌抗体所构成的免疫屏障。紧密连接是肠上皮细胞间的主要连接方式,对维持上皮细胞极性、调节肠屏障的通透性、防止细菌、内毒素和毒性大分子物质进入体内发挥着重要作用。ZO-1是组织紧密连接的重要组成成分,其表达上调可调节组织的通透性。因此,在分子生物学水平上检测ZO-1的变化对研究断奶仔猪腹泻的机理具有重要的意义,同时可以降低仔猪断奶综合征的发病率。 研究目的:建立起PCR反应体系,可以同时检测LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ三种大肠杆菌毒力因子。检测紧密连接蛋白ZO-1在断奶仔猪ETEC性腹泻时胃肠道组织中的分布及表达水平及意义。 实验方法:本实验选取24头断奶仔猪,攻入ETEC,分别取1d、3d、5d、7d的胃黏膜、回肠及结肠组织,采用半定量PCR法摸索反应适合的条件,实时荧光定量PCR的方法检测胃肠道紧密连接蛋白ZO-1以及内参基因GAPDH的mRNA丰度;采用Western blotting的方法检测胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的蛋白表达量。 实验结果:成功地建立了ETEC肠毒素三种毒力因子LT、ST-Ⅰ和ST-Ⅱ的PCR分子生物学检测方法,为研究ETEC性断奶仔猪腹泻提供了科学的理论依据。实时荧光定量PCR结果表明:ZO-1 mRNA的表达水平与组织的分化水平有关,随着断奶仔猪腹泻程度的加重,ZO-1的表达率也随之下降。胃肠道紧密连接蛋白ZO-1在三种组织中均有表达,可见在攻入ETEC后5d、7d表达量差异极其明显,且其表达量随着腹泻时间的延长逐渐呈降低趋势;Western blotting结果表明:ZO-1蛋白表达量逐渐降低,表达水平明显低于内参基因的表达量。 分析总结:通过本实验成功的揭示了肠屏障功能调控的部分分子机制,对于提升该领域的基础科学理论水平具有重要的临床实践意义,而且为断奶仔猪生产提供了技术研究平台,为营养调控仔猪肠道结构与功能提供了一些理论依据,为防治“仔猪早期断奶综合征”,提高仔猪成活率开辟出了一条新思路,从而促进养猪业的增效和增收。……   
[关键词]:ETEC;紧密连接蛋白ZO-1;mRNA丰度;蛋白表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年