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猪血中超氧化物歧化酶(SOD)和血红素的提取及SOD的应用研究

葛静微

   我国猪血资源非常丰富,猪血的蛋白质含量高、氨基酸组成平衡,是优质的蛋白来源。猪血中以红细胞为主,红细胞中最主要的蛋白是血红蛋白,含量占血细胞蛋白总量的90%以上。开发猪血资源不仅可增加蛋白质饲料来源、增加用于食品、医学等领域的原料资源,又可减少屠宰废弃物对环境的污染,具有很好的经济和社会效益。本论文以猪血为原料提取SOD和血红素,进行初步鉴定、储存过程中的稳定性实验,并对SOD的体外抗氧化活性及其对肿瘤细胞凋亡的影响进行研究。 1 SOD和血红素提取工艺条件的优化 采用超声波破碎细胞膜,SOD比活力和血红素提取率都较高的超声条件为:超声功率70 W、超声时间15 min及超声温度40℃;利用Box-Behnken的中心组合旋转设计试验,Design-Expert软件处理数据,得出SOD的最佳提取条件:热变温度65.2℃、热变时间26.1 min、0.1 mol/L氯化铜添加0.423mL/15mL溶血液;血红素的最佳提取条件为:酸性丙酮添加量为血红蛋白的5.66倍,酸酮比为3%,抽提时间为42.00 min时血红素提取率达到最大值为0.225 g/100 mL。 2 SOD和血红素的初步鉴定 SOD提取样品的紫外光谱分析最大吸收峰为265 nm,与文献报道一致;血红素标品和样品进行紫外光谱、红外图谱和高效液相色谱分析确定提取物为血红素。选择甲醇:水为80:20,在所选流动相和仪器条件下,检出限、精密度和稳定性均良好,血红素的纯度为72%。 3 SOD和血红素的储存稳定性研究 SOD和血红素在储存过程中,冷冻保存有利于SOD和血红素的稳定。储存20d时,冷冻保存SOD的相对活力为90%,冷藏保存相对活力为85%,室温避光保存为82%,室温光照相对活力为80.25%;储存9周后,冷冻保存的血红素相对含量为91.58%,冷藏保存、室温避光保存和室温光照保存的相对含量分别为88.61%、83.46%和81.75%。 4 SOD的体外抗氧化活性及对小鼠荷瘤sp2/0细胞凋亡的影响 SOD的体外抗氧化实验中以Vc作为对照品,检测SOD的体外抗氧化活性,由实验结果可知SOD有一定的抗氧化活性,但其抗氧化活性比同浓度的Vc低。 采用研究细胞凋亡的最基本的方法:凋亡细胞的形态学观察。由本实验可见未加SOD的小鼠荷瘤sp2/0细胞生长良好,表现为圆形;经不同浓度SOD作用一段时间后的小鼠荷瘤sp2/0细胞其细胞核明显固缩、碎裂,表现为凋亡形态,且随着作用浓度的增加,细胞核固缩碎裂的程度增加。SOD在体外可在一定程度上抑制小鼠荷瘤sp2/0细胞的增殖,呈时间-效应和剂量-效应的关系,能够诱导小鼠荷瘤sp2/0细胞的凋亡。……   
[关键词]:超声波;提取;结构鉴定;储存稳定性;抗氧化;细胞凋亡
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2010年