手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用

刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍

  本研究通过融合表达Rv3872、CFP-10和ESAT-6.以改良牛结核病特异性鉴别诊断抗原CFP-10-ESAT-6,提高牛结核抗体鉴别诊断法的灵敏度。利用PCR方法.克隆牛分枝杆菌RD1区上述三个基因,通过酶切连接方法,将三个基因串联在pET-28a载体上,基因之间用Linker序列连接。融合基因在大肠杆菌内经IPTG 0.4mmol L-1诱导3h,目的蛋白经SDS-PAGE证实表达在上清中.Western-blot分析证实表达蛋白具有免疫原性。以所表达的融合蛋白作为包被抗原建立间接ELISA.检测了44份牛分枝杆菌感染背景清楚的临床奶牛血清。26份阳性血清中,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA检出阳性样本18份.检测灵敏度为69%,而CFP-10-ESAT-6融合蛋白ELISA只检出阳性样本4份。18份阴性血清中,两种ELISA均检出17份阴性血清,特异性都为94(17/18)。因此,Rv3872-CFP-10-ESAT-6融合蛋白在对牛结核抗体检测特异性没有降低的情况下.敏感性获得了显著提高.这对牛结核病的早期鉴别诊断方法的建立具有重要意义。……   
[关键词]:牛结核;Rv3872;CFP-10;ESAT-6;诊断
[文献类型]:会议论文
[文献出处]: 《中国奶业协会年会论文集2009(上册)2009年