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10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒X基因表达的抑制作用

侯伟;倪勤;沃健儿;李敏伟;刘克洲

  目的以增强绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告分子,探讨10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒(HBV)X基因表达的抑制作用。方法设计并合成三种能针对HBV X基因的特异性10-23 DNAzymes,分别命名为DrzHBVX-7,DrzHBVX-8和DrzHBVX-9,能分别特异的识别HBV X基因开放阅读框(ORF)的A1376UG。将内有HBV X全基因片段(不合终止密码)的融合表达质粒 pHBx-EGFP与10-23 DNAzymes共转染AD293细胞作为共转染组,用pHBx-EGFP单独转染AD293 细胞作为对照组,分别用荧光显微镜观察并用流式细胞仪检测细胞荧光强度,同时用半定量一步法 RT-PCR分析融合荧光蛋白HBx-EGFP mRNA的相对表达量。结果各共转染组细胞荧光蛋白 HBx-EGFP的表达均明显弱于对照组(P<0.05);各试验组HBx-EGFPmRNA的相对表达量与对照组比较也均明显减少(P<0.05);各共转染组细胞之间HBx-EGFP的表达及HBx-EGFP mRNA的相对表达量并无明显差异(P>0.05)。结论10-23 DNAzyme对乙型肝炎病毒X基因的表达有特异抑制作用,在乙型肝炎病毒感染的基因治疗中会有潜在的应用价值。……