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肠道病毒71抗原ELISA定量检测方法构建及其应用

韩金乐;贾继宗;李川;杨亮;何德磊;李娟;叶祥忠;李益民

  目的建立肠道病毒71型(EV71)抗原的定量ELISA检测方法。可用于EV71疫苗研发及生产过程中的病毒抗原含量检测、EV71的TCID50试验及病毒免疫原性与免疫保护性的关系分析。方法 EV71或其重组抗原免疫小鼠制备的高亲和力抗EV71的中和单抗用作包被抗体和HRP标记抗体,构建定量检测EV71抗原的双抗体夹心ELISA方法 ,该方法经方法验证。以EV71国家抗原标准品为定量依据检测样品中的EV71抗原量,比较本法与显微观察法检测的EV71 TCID50。对EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平进行相关性分析。结果本方法检测抗原的线性范围为0.125-4.0 U/ml、R~2=0.9911、灵敏度达到0.125 U/ml,试剂特异性、准确性、精密度和稳定性良好。本法与显微观察法检测的EV71TCID50的相关性高,r=0.990。21株EV71病毒抗原的特异比活与免疫血清中和抗体间存在强相关性。结论构建了性能良好的EV71抗原的ELISA定量检测方法 ,取代显微观察法准确、客观和特异的分析EV71的TCID50,本方法用于检测EV71抗原的特异比活,有望取代动物效力实验评价疫苗的免疫保护性。……