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黄芪甲苷抑制EAE小鼠免疫初期树突状细胞的成熟和功能

杨柳;袁金凤;韩欣妍;胡智星;黄菲;吴晓俊

  目的:树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是免疫系统中专职的抗原提呈细胞。DCs参与多发性硬化症(Multiple sclerosis,MS)初期的发病。黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI),是一种从中药黄芪中分离出来的活性单体,具有广泛的药理作用。在课题组前期研究中,它已被证明有益于实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)的防治。然而,目前为止尚未报道ASI在MS/EAE发展初期对DCs成熟和功能的影响。在本研究中,我们将探究ASI在EAE初期给药的疗效,并阐明ASI调控DCs成熟和功能的潜在机制。材料和方法:从EAE诱导前3天开始,每天给小鼠腹腔注射ASI(20mg/kg),持续至免疫后第7天。记录小鼠的神经行为学评分和体重至免疫后22天。H&E和LFB染色分析脊髓的炎性浸润和脱髓鞘。机制研究分别从ASI对骨髓来源的BMDCs和免疫7天EAE小鼠脾来源的DCs的影响两方面展开:流式细胞术检测DCs中CD11c+,CD80,CD86,CD40及MHCII的表达;ELISA和QPCR分析DCs分泌IL-6,IL-12p35,IL-12p40和IL-23p19等炎症因子变化;DC与T细胞共培养以探究ASI是否通过调控DC作用于T细胞亚群的分化。蛋白免疫印迹分析在DCs中ASI对NFκB和MAPKs信号传导途径蛋白活化的影响;ICC检测LPS刺激的BMDCs中p-NFκB的核转位。结果:与模型组相比,ASI给药小鼠EAE发作推迟3-4天(p <0.001),ASI给药缓解了EAE小鼠的病情(p <0.001)。HE和LFB染色发现ASI给药减少了EAE小鼠脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘。ASI给药显著降低了EAE小鼠脾CD11c,CD86,CD40和MHC II的表达(P<0.05,P<0.01或P<0.001),对CD80无影响。在BMDCs中,ASI(25,50和100μM)抑制了CD11c,CD86,CD40和MHCII,但不抑制CD80表达。QPCR和ELISA检测ASI给药后降低了DCs IL-6,IL-12p35和IL-12p40的(P<0.05或P<0.01),对IL-23p19无影响。DCs与T细胞共培养结果显示,ASI(25,50和100μM)处理的BMDCs剂量依赖性抑制CD4+T细胞向Th1和Th17的分化(P<0.05,P<0.01或P<0.001)。体内外实验均表明ASI给药下调了IKK,IκB和NFκB和三种MAPK蛋白(ERK,JNK和p38 MAPK)的磷酸化水平(P<0.01或P<0.001)。结论:总之,我们的研究结果表明,免疫初期给药ASI对小鼠EAE的缓解作用可能是通过抑制DCs的成熟和功能来介导的。本研究为ASI应用于MS的临床研究奠定了理论基础。……