手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

小鼠DAZL及RBMY蛋白的靶mRNA的分离及鉴定

曾梅;陈述;张立营;孙华钦;卢亦路;刘燕燕;邓文骞;陶大昌;马用信

  目的由于Dazl和Rbmy基因均编码在睾丸特异表达的RNA结合蛋白,为了分离这两个蛋白质在睾丸中的的靶mRNA。方法运用特定核苷酸结合蛋白分离(isolating specific nucleic acids associated with proteins,SNAAP)和凝胶滞后(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)技术。结果分离到DAZL蛋白的靶基因有17个,分别是:Tssk2、Nbn、Tpx-1、Ranbp5、Dydc1、Rap2c、Acbd6、Phff13、Ppp2r5a、Chchd2、Mfn1、Ercc1、S1c25a1、Dnmt31、TENR、SOX17和SPNR,在这些靶基因中重点研究了Tssk2,该基因编码睾丸特定的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,并通过凝胶滞后实验证明了DAZL蛋白能与该基因的mRNAs的3 UTR结合。而mRBMY蛋白的靶mRNA分离出了15个,分别是Lin9、Nek1、Acbd6、Laptm4a、Spa17、Tcr5、Tex15、Qser1、Tssk2、Usp1、Co19a3、Sltm transcript variant 1、Sltm transcript variant 2、RBMY1A1 transcript variant 1和RBMY1 A1 transcript variant 2,在这些靶基因中,重点研究了Spa17基因,该基因编码哺乳动物睾丸和精子的特定蛋白,在精母细胞和精子中高表达,与精原细胞的分化密切相关。通过凝胶滞后实验,证明了mRBMY蛋白能够结合Spa17的mRNA结合,结合的区域在mRNA的1- 70nt处,该段序列含有丰富的olig(A),这暗示mRBMY蛋白可能对olig(A)序列具有高亲合性。结论由于这两个基因均是无精症因子的候选基因,他们的靶mRNA的分离和鉴定有助于进一步阐明他们在精子发生过程中的生物学功能。……