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猪圆环病毒2型ORF2基因的表达及活性研究

谢彩华;闫若潜;吴志明;张志凌;张健;陈涛

  根据猪园环病毒2型(PCV2)基因序列设计一对特异性引物PCR扩增PCV2去核定位信号(nuclear localizationsignal,NLS)的Cap蛋白基因(ORF2),经SphI/HindⅢ双酶切后将其克隆到表达载体pQE30中并转化大肠杆菌JM109,采用IPTG进行诱导表达,采用自行创新的纯化方法对表达的融合蛋白进行纯化,Western Blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性。结果表明,成功克隆了无核定位信号的ORF2基因,其分子量大小579bp;表达的rCap蛋白大小24.1 kD左右,与预期大小相一致;经纯化后的rCap蛋白纯度在95%以上;Western Blot鉴定结果表明Cap蛋白可以和抗PCV2抗体反应,具有很好的抗原性。本研究为以后进一步建立以Cap蛋白为包被抗原的PCV2间接ELISA诊断方法以及PCV2疫苗的研究等奠定了基础.……