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布鲁氏菌外膜蛋白bp26基因的克隆、表达及活性鉴定

赵伟栋;韩文瑜;孙长江;雷连成

  目的克隆并测序布鲁氏菌外膜蛋白基因bp26,重组表达bp26蛋白,初步验证其免疫学特性。方法从流产布鲁氏菌标准株544A的基因组中扩增得到bp26基因,凝胶回收连接pMD18-T克隆载体并转化大肠杆菌感受态细胞DH5a,蓝白斑筛选阳性克隆,经PCR鉴定,酶切鉴定正确并测序。克隆入融合表达载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达融合蛋白。利用western-blot技术分析表达蛋白GST-bp26的免疫学特性。结果bp26基因的全长为753bp,测序结果与GenBank中已报道的布鲁氏菌株完全一致。SDS-PAGE电泳显示GST-bp26融合蛋白分子量为54KD。布鲁氏菌免疫兔多克隆血清能特异性识别所表达的蛋白而不与载体蛋白发生反应。结论成功表达了布鲁氏菌外膜融合蛋白GST-bp26,它可以被布鲁氏菌免疫多克隆血清特异性识别,表现出良好的抗原性,为之后的实验室诊断方法的建立和亚单位疫苗的研究打下良好的基础。……