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利用抑制性差减杂交筛选禽流感病毒感染相关基因

张万坡;程国富;毕丁仁;胡薛英;谷长勤

  利用抑制性差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了禽流感病毒感染和正常对照鸡肾组织差异表达的双向差减cDNA文库,通过斑点杂交筛选到包括干扰素刺激基因(ISG12)、淋巴细胞抗原复合体基因(LY6E)、基质Gla蛋白基因 (MGP)、溶菌酶基因、IFN诱导的跨膜蛋白基因及一个没有任何同源信息的EST等6个表达上调基因;KIAA1259、谷光苷肽转移酶基因(GST)、酒精脱氢酶基因(ADH1)、突触结合蛋白基因(SytVx)、葡萄糖6磷酸酶催化哑基基因(G6PC)、钠/二羧酸转运蛋白基因(SDCT)、 MGC4504基因、MGC69686基因和一个没有任何同源信息的EST等9个表达下调基因。通过半定量RT-PCR和Northern杂交对其中8个基因的差异表达进行了验证,并利用Northern杂交对干扰素相关基因ISG12在鸡的不同组织中的表达进行了分析。试验结果初步阐明了高致病性禽流感病毒致病机制和鸡的抗病毒机制。……